دراسة كيموحياتية لانزيم الكايتينيز وعلاقته بمرض الثلاسيميا == Biochemical Study of Chitinase and its Relation with Thalassemia
Author name:
براء رعد محمود البرهاوي
Supervisor name:
ذكرى علي علوش
General topic:
Chemistry
Specific topic:
Analytical Biochemistry
Degree:
Master
University:
University of Al Mosul - College Of Science - Chemistry Department
Language:
Arabic
University location:
Mosul
First pages:
25T1619 - p.pdf
Abstract:
تضمن البحث دراسة كيموحيوية لانزيم الكايتينيز وعلاقته بمرض الثلاسيميا ، اذ ظهر من خلال جمع (87) نموذج مصل دم لاشخاص مصابين بالمرض تتراوح اعمارهم بين (2 - 45 year) من كلا الجنسين وجود انخفاض معنوي في فعالية انزيم الكايتينيز عند مقارنته مع (66) نموذج مصل دم لاشخاص اصحاء تتراوح اعمارهم بين (1 - 55 year) من كلا الجنسين . ووجد ان المعدل الطبيعي لفعالية انزيم الكايتينيز في مصل دم مجموعة السيطرة (1.79±0.10 U/ml ) وفي مصل دم مجموعة المرضى (±0.11 U/ml 1.29), كما وجد ان فعالية الانزيم لاتتاثر بالجنس بينما تزداد مع تقدم العمر لدى مجموعتي السيطرة والمرضى ,وبينت النتائج عدم تاثر فعالية الانزيم بنوع المرض (الفا او بيتا - ثلاسيميا) وشدة مرض البيتا - ثلاسيميا (البيتا - ثلاسيميا الكبيرة والبيتا - ثلاسيميا المتوسطة) واستئصال الطحال . اظهرت النتائج وجود انخفاض معنوي في مستوى الهيموكلوبين ، بينما لوحظ وجود ارتفاع معنوي في مستوى كل من انزيم الكلوتاميت بايروفيت ترانس امينيز (GPT) وانزيم الكلوتاميت اوكزالواسيتيت ترانس امينيز (GOT) والحديد (Fe) والسعة الكلية لارتباط الحديد (TIBC) لدى مرضى الثلاسيميا مقارنة بمجموعة السيطرة . ودرست العلاقة بين فعالية انزيم الكايتينيز وعدد من المتغيرات السريرية لدى مجموعتي السيطرة والمرضى وذلك بايجاد معامل الارتباط الخطي ، وتبين ارتباط انزيم الكايتينيز بعلاقة عكسية معنوية مع الحديد وبعلاقة طردية معنوية مع انزيم (GPT) لدى مجموعة السيطرة وكذلك تبين ارتباط انزيم الكايتينيز بعلاقة طردية معنوية مع الهيموكلوبين لدى مجموعة المرضى . واظهرت طريقة عزل انزيم الكايتينيز من الجسيمات الحالة لبلازما الدم(الحزمة B) عدد مرات تنقية عالية مقارنة بطريقة عزل الانزيم من محلول راسب كبريتات الامونيوم بتشبع (75%) (الحزمة E) لبلازما الدم بتقنية الترشيح الهلامي باستخدام عمود الفصل الحاوي على (Sephadex G - 75) . كما وجد ان الحزمتين البروتينيتين ( BوE) لهما وزن جزيئي (1000 ± 39810 دالتون) و(1000 ± 36307 دالتون) على التوالي . درست الظروف المثلى لعمل انزيم الكايتينيز للحزمتين المعزولتين فوجد ان لهمزامن تفاعل امثل عند الدقيقة (35) و(30) والاس الهيدروجيني الامثل عند (pH= 7) ودرجة حرارة مثلى (60C) و(55C) والتركيز الامثل لمادة الاساس الكايتين الغروي (12 mg/ml) و(10mg/ml) وقيمة السرعة القصوى (2.08U/ml)Vmax و(2.00U/ml) وقيمة ثابت ميكيلس - منتن Km (2.12mg/ml) و(2.00mg/ml) على التوالي . وتم تقدير الفعالية البايولوجية لانزيم الكايتينيز المعزول من بلازما الدم (الحزمتين Bو E) تجاه نمو بعض البكتريا والفطريات الممرضة ووجد ان للانزيم القابلية على تثبيط نموها بنسبة (100%) للحزمة B)) و(50 %) للحزمة (E). | The present research is a biochemical study of chitinase and its relation with thalassemia . It had been found that a (87) of serum samples for thalassemia patients at ages between (2 - 45 years) of both sex had shown a significant decrease of chitinase activity when compared with (66) serum samples of controls at ages between (1 - 55 years) of both sex. It had been found that the normal range of chitinase activity in serum of healthy control (1.79 ± 0.10 U/ml) and in serum of patient (1.29±0.11 U/ml),it was also found that the activity was not affected by sex whereas an increase was found with aging in both patients and control. The result demonstrated that the chitinase activity was not affected by the type of thalassemia ( or β - thalassemia), distress of β - thalassemia (β - thalassemia major and β - thalassemia intermediate) and splenctomy. The results also showed a significant decrease in hemoglobin level while show a significant increase in (GPT), (GOT), (Fe) and (TIBC) of thalassemia patients compared with control. Correlation coefficient between chitinase activity and clinical variables of thalassemia patients studied showed a significal reversible relation between chitinase and (Fe) and irreversible relation between chitinase and(GPT) in control. It also show a reversible relation between chitinase and hemoglobin in patients. The isolation method of chitinase from lysosome of plasma (protein peak B) showed a high number of purification compared with the method for the isolation of chitinase from ammonium sulphate solution (75%) saturation of plasma (protein peak E) by gel filtration technique, using column containing sephadex G - 75, it was found that the two peaks (B and E) had apparent molecular weight (39180 ± 1000 dalton) and (36307 ± 1000 dalton) respectively. The study of the optimum condition of chitinase activity in the two peaks show an optimum reaction time at (35), (30) minute , optimum pH at (7) , optimum temperature at (60C), (55C) , optimum concentration of substrate colloidal chitin (12 mg/ml), (10 mg/ml) , Vmax (2.08 U/ml) , (2.00 Uml) and Km (2.12 mg/ml) and (2.00 mg/ml) respectively. Finally the biological activity had been improved for the isolated chitinase from plasma (for B and E peak) upon the growths of some bacteria and fungi pathogen , it had been found that the enzyme had the ability to inhibit its growth at ratio (100%) for peak (B) and (50%) for peak (E)
