عزل ودراسة انزيم الديوكسي رايبونيوكليز الحامضي من دم المرضى المصابين باحتشاء العضلة القلبية الحاد == Isolation and Study of Acid Deoxyribonuclease from Blood of Acute Myocardial Infarction Patients
Author name:
رغد عبد الموجود محمد حمو
Supervisor name:
ليلى عبد الله مصطفى عبد الله
General topic:
Chemistry
Specific topic:
Analytical Biochemistry
Degree:
Master
University:
University of Al Mosul - College Of Science - Chemistry Department
Language:
Arabic
University location:
Mosul
First pages:
25T1617 - p.pdf
Abstract:
تضمن البحث الحالي دراسة كيموحيوية لانزيم الديوكسي رايبونيوكليز الحامضي DNaseII الذي تم عزله من مصل دم الاشخاص المصابين باحتشاء العضلة القلبية الحاد لغرض التحقق من استخدام الانزيم كمؤشر للاصابة بالاحتشاء القلبي الحاد، اذ تم جمع (135) عينة دم من الاشخاص المصابين الراقدين في مستشفى ابن سينا التعليمي / وحدة العناية المركزة تراوحت اعمارهم بين (90 - 31) سنة وكان عدد الذكور والاناث المشمولين في الدراسة (97) و(38) على التوالي، كما جمعت (90) عينة لاشخاص اصحاء تراوحت اعمارهم بين (70 - 15) سنة لغرض المقارنة ولايجاد القيمة المرجعية لانزيم DNaseII.واظهرت النتائج وجود زيادة معنوية في فعالية انزيم DNaseII في مصل دم الاشخاص المصابين اذ بلغ معدل الفعالية (268.0+6.90) وحدة/لتر مقارنة مع معدل الفعالية للاشخاص الاصحاء (25.70+1.60) وحدة/لتر، لذا يعد انزيم DNaseII كمؤشر للاصابة باحتشاء عضلة القلب الحاد.تم عزل انزيم DNaseII من مصل دم الاشخاص المصابين بالاحتشاء القلبي الحاد باستخدام التقنيات الحياتية المختلفة حيث تم فصل حزمتين بروتينيتين رئيستين من البروتينات بتقنية الترشيح الهلامي للراسب البروتيني الناتج من عملية الترسيب بكبريتات الامونيوم، واظهرت واحدة منها فقط فعالية لانزيم DNaseII، وقدر وزنه الجزيئي باستخدام تقنية الترشيح الهلامي وكان بحدود (67000) دالتون.وتضمن ايضا ايجاد الظروف المثالية لفعالية انزيم DNaseII وكانت الفعالية القصوى كالاتي باستخدام (32) مايكروغرام/لتر من الحامض النووي الديوكسي رايبوزي DNA كمادة اساس للانزيم، و(0.1) مولار من المحلول المنظم للخلات عند الاس الهيدروجيني (pH=4.5) وبدرجة حرارة (40) درجة مئوية وبزمن تفاعل (150) ثانية.تم ايجاد قيمة السرعة القصوى وثابت مكيلس - منتن باستخدام رسم لاين ويفر - برك وكانت مساوية لـ (125) وحدة/لتر و(1.8) مايكروغرام/مليلتر على التوالي.واخيرا تمت دراسة تاثير بعض المركبات الكيميائية والنيوكليوتيدات والادوية على فعالية انزيم الـ DNaseII، ووجد ان الايزورديل يعمل كمثبط تنافسي لفعالية الانزيم عند تركيز (0.01) مولار | The current research is a biochemical study of acid deoxyribonuclease DNaseII which was isolated from the serum of patients suffering Acute myocardial infarction (AMI) in order to use the the enzyme as a marker for identification of AMI. blood samples from (135) AMI patients who entered in the CCU of Ibn - Sina teaching Hospital, their ages ranged between (31 - 90) years, (97) males and (38) females, the blood of (90) samples were collected from healthy individuals their ages ranged between (15 - 70) year as control. The results showed a significant increase in the activity of DNaseII enzyme in the serum of the AMI patients with an activity mean (268.0+ 6.90) U/L compared to the activity of healthy people (25.7+ 1.60) U/L. The DNaseII has been isolated from the blood of AMI patients using different biochemical techniques, two proteins components had been isolated by gel filtration technique from precipitate produced by ammonium sulfate. It was found that only the first peak has DNaseII enzyme activity. The apparent molecular weight of DNaseII using gel filtration was found to be (67000) Dalton. The research was concerned with finding of optimum conditions for DNaseII activity. Maximum activity was obtained using (32) g/ ml of deoxyribonucleic acid as a substrate for the enzyme, acetate buffer at pH (4.50) and temperature of (40) degree C0 at a reaction time of (150) sec. using Line Weaver - Burk blot, it was found that Maximum Velocity Vmax and Michaelis Menten constant Km have the values of (120.5) U/ L and (1.8) g / ml respectively. Finally, the effect of some chemical compounds and nucleotides and drugs on the DNaseII activate was also studied. It was found that Isordil Showed a competitive inhibition on the activity of the enzyme at a concentration of (0.01) M.
