دراسة تشخيصية لبكتيريا المسبحات القيحية والتوصيف الجزيئي لبعض عوامل الضراوة في مرضى التهاب الوزتين == Diagnostic Study for Streptococcus Poyogenes and Molecular Characterization for Some Virulence Factors in Tonsillitis Patients
Author name:
مصطفى عبد الكريم حميد المسعودي
Supervisor name:
لميس عيد الرزاق عبد اللطيف | محمد عبد كاظم السعدي
General topic:
Medicine
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
University of Babylon - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Babylon
First pages:
19T1689 - p.pdf
Abstract:
تم في هذه الدراسة الحصول على (100)عينة (مسحات الحلق وعينات الدم) من (100) مريض مصابين بالتهاب اللوزتين من كلا الجنسين من المراجعين الى مستشفى الحلة الجراحي (وحدة ENT) (من تشرين الثاني 2015 الى اذار 2016) تراوحت اعمار المرضى الذين شملتهم الدراسة من5 - 60 سنة. تعرض كل مسحات للزراعة الهوائية على اوساط زرعية انتقائية، وكان من مجموعة (100عينة). ظهر65 عينة بكتريا موجبة، في حين ظهرت 35 عينات زرع سالبة .ومن بين 65عينة يشتبه فقط 24 عينة من بكتريا المسبحيات القيحية . تم استخدام بادئات نوعية (primers) في تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) للتحري عن الجين الخاصة Spy1258))حيث يعتبر هذ الجين كمعيارلهذا البكتريا. وباستخدام الطريقة الجزيئيه التي تعتمد على دور هذا الجين, اظهرت النتائج وجود 13عينه من اصلا 24عينه تكون موجبه لهذا الجين ,بينما وجود عينتين اثنين فقط (2%) من اصلا 100 عينة دم تكون موجبه لهذا الجين. التوصيف الجزيئي لهذا البكترياThe pyrogenic exotoxin(SpeA, SpeB, SpeC) يتم باستخدام بادئات خاصه حيث اظهرت النتائج وجود عينتين(15.38%) من جين SpeA))من اصلا 13عينه بينما اوجد الدراسة عينتين(100%) لهذا الجين بالدم . وكذلك اظهرت النتائج وجود 7عينات (53.7%)من جين(SpeB)من اصلا13,وكذلك وجد عينتين بالدم.وايضا اظهرت النتائج وجود6عينات (46.15%)من جين (SpeC) من اصلا 13 عينه بينما وجد عينه واحدة فقط بالدم (50%).The streptokinase(Ska) حيث اظهرت النتائج وجود 9عينات(69.2%) من اصل 13عينه لهذا الجين ,بينما وجد عينتين لهذا الجين بالدم(100%).The multiple gene activator (Mga) حيث اظهرت النتائج وجود 6عينات(46.15%) من اصلا 13 عينه لهذا الجين,بينما اظهرت الدراسه عدم وجود هذا الجين بالدم. باستخدام لوحة زراعة الانسجة كان تكوين biofilm قوي بنسبة (79.9%).وبنسبة( 23%) كان تكون biofilmمتوسط بينما اظهرت النتائج عدم وجود تكون ضعيف لbiofilm. تم في هذا الدراسة دراسة تاثير كل من خل التمر وخل التفاح وخل العنب ,حيث اظهرت النتائج ان خل التمر له القدرة على منع تكوين biofilm بنسبة(100 %).اما بالنسبة لخل التفاح فكانت نسبة (92.3%) واظهرت النتائج ان نسبة خل العنب (84.6%). خضعت جميع العزلات لاختبار الحساسية للمضادات الحيوية .وقد وجد ان جميع عزلات هذه البكتريا كانت حساسة بشكل تام (100%) لكل من Imipeneme وMeropenem.ولكنها حساسة بدرجة متوسط لكل من Ceftriaxon وAzithromycinو Amoxicillinو Tetracyclineو Clarythromycin . كما واظهرت العزلات مقاومة ل Erythromycin . تم جمع عينات الدم من كلا المجموعتين لقياس المعيار المناعي (IFN - γ)بطريقة الامتزاز المناعي المرتبط بانزيم.حيث اظهرت النتائج انه لايوجد فرق معنوي بين مجموعة المصابين ومجموعة الاصحاء((p<0.05. | In this study, one hundred throat swabs and blood samples obtained from patients suffering from tonsillitis from both sex who were attending to an ENT unit in Al - Hilla General Teaching Hospital during a period of three months from (October 2015 to January 2016). The patient’s age ranged from (5 - 60) years. All swabs were subjected to aerobic culturing on selective media and it was out of the total of (100 samples). 65 samples showed positive bacterial culture, while 35 samples showed negative culture. Among 65 only 24 isolates of S.pyogenes were suspected. In this study the specific primer Spy1258 (encoding a putative transcriptional regulator) that consider the golden stander for strep pyogenes and the results of this study found only 13 isolates out of 24 isolates from throat swab of S.pyogenes were positive to this primer, while only 2 samples out from 100 blood samples give positive result were detected by molecular method focusing on the role of Spy1258 gene. Molecular detection of S. pyogenes (SpeA, SpeB, SpeC) were done by using specific primer. It was found that SpeA was observed in two (15.38%) isolates from throat swab, while it was found that two (100%) samples from patients' blood of S. pyogenes give positive results for this gene. Also the (SpeB)was found that two (100%)samples from patients' blood of S. Pyogenes contain this gene, while it was observed in 7 isolates out of 13 at percentage(53.8%) isolates from throat swab. On the other hand, it was found that SpeC was seen in six (46.15%) isolates from throat swab, while it was found that one (50%) samples from the patient's blood of S. pyogenes give positive results with this gene. Moerever, streptokinase (Ska) was also detected in S.pyogenes, It was found that Ska was observed in 9 isolates (69.2%) from throat swab, while it was found that two (100%) samples from the patients blood of S. pyogenes contain this gene. Multiple gene activator (Mga) was detected by using specific primer. It was found that Mga was observed in 6 isolates (%46.15) from throat swab, while it was no found this gene in blood samples Biofilm formation was also investigated by using Tissue culture plate. It was shown that biofilm formation was (76.9%) strong biofilm formation, (23%) moderately biofilm formation and no isolates that express non biofilm formation. The effect of dates vinegar, apple vinegar and grape vinegar on bacterial isolates were studied and the results showed that date vinegar prevented biofilm formation in 13(100%) biofilm producer isolates of S. pyogenes. While Apple vinegar prevented biofilm formation in 12 (92.3%) biofilm producer isolates of S. pyogenes. Also, in the third type; Grape vinegar there were two isolates not eradicated, while 11 (84.6%) isolates were eradicated depending on biofilm criteria. All the identified S. pypgenes isolates were subjected to in vitro antibiotics susceptibility test by modified Kirby - Bauer disc diffusion method. It has been found that S. pyogenes isolates were completely sensitive (100%) to Imipenem, Meropenem and moderate to ceftriaxone, Azithromycin and clarithromycin at ratio 80%, 78%, 76.9% respectively. But lesser to each of Amoxicillin and Tetracycline was 54%, 55%, respectively, and the results showed that resistance to erythromycin about 84.6%. Blood samples were collected from patients and control groups to estimate ELISA test for cytokines (IFN - γ)and the results shown and no significant differences (p>0.05) between patients (593 pg/ml) and controls (567.77 pg/ml).
