تحضير وتوصيف الجسيمات الدهنية النانوية وربطها مع مستضد طفيلي Leishmania donovani == Preparation and characterization of nanoliposome and entrapment of Leishmania donovani antigens
Author name:
روعة نجم عبد الله الخميسي
Supervisor name:
بدر محمد عباس العزاوي | علي عبد الرحمن الشيخلي
General topic:
Biology
Specific topic:
Zoology
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
24T3262 - p.pdf
Abstract:
يعتبر استخدام الجزيئات النانوية التي تحمل المستضد صناعيا والقابلة للتحلل الحيوي كجزيئة مساعدة من المواضيع المهمة في تحضير اللقاح ومن الخطوات المهمة في السيطرة على تحرر المستضد لتحسين الاستجابة المناعية . تتكون الجسيمات الدهنية النانوية من مركبات طبيعية والتي تشجع بدورها الباحثين على استخدامها كمساعدات نانوية طبيعية . في هذه الدراسة , استخدمت الجسيمات الدهنية النانوية كمساعدات لقنص المستضدات الذائبة المستخلصة من طفيلي اللشمانيا الاحشائية كخطوة اولى باتجاه تحضير لقاح ضد اللشمانيا . تم تنشيط الطفيلي من خلال تنميت طور الطفيلي ) 104 promastigote / ml ) في الوسط الزرعي ( RPMI ) في درجة تحضين 23 م0 ولمدة اربعة ايام . اعتمدت اللقيحة بعمر 4 ايام وبنسبة 104 خلية في المليلترالواحد في تلقيح وسط (SNB9 ) لانتاج الكتلة الحيوية والتي تستخدم لاستخلاص المستضد . تم استخلاص المستضدات الذائبة من خلايا الطفيلي بعد اربعة تمريرات في نفس الوسط الزرعي ليتم بعدها قنصها في الجسيمات الدهنية النانوية والمحضرة انيا . حضرت الجسيمات الدهنية النانوية من ( mM Phosphatidylcholine 4 ) ) 2.2 mM Cholesterol ) و(mM Phosphatidylethanolamine 0.55) وبنسبة 1 : 2 : 7 ضمن جميع طرق التحضير المختلفة وتم دراسة توصيفها الفيزياوي والكيمياوي باستخدام (SEM ) و(AFM ) و( FTIR) و(Zeta Potential ) لتقدير حجم وشكل وشحنة الجسيمات وتحديد المجاميع الكيمياوية المتكونة .من النتائج لوحظ ان الجسيمات التي تم تحضيرها بطريقة الكلوروفورم تحمل شحنة سالبة ولاتظهر تكتل بعد عملية التحضير ولا تزيد اقطار الجسيمات الناتجة عن 75 نانوميتر وتحمل مجاميع كيمياوية (PO2 ) و(CH2) و(CH3 ) . تم احتساب كفاءة قنص (EE) الجسيمات الدهنية النانوية للمستضدات الذائبة وكانت النسبة المئوية لكفاءة القنص هي 62% و50% و27.5 % للجسيمات المحضرة بطريقة الكلوروفورم والسيفادكس G25و السيفادكس G75 على التوالي . من جانب اخر , تم دراسة الثباتية للجسيمات الدهنية النانوية القانصة للمستضدات بدرجتي حرارة تخزين 4 و37 م0 واظهرت النتائج ان الجسيمات التي تم تحضيرها بطريقة الكلوروفورم تمتلك درجة ثباتية كان مقدارها 32% في درجة حرارة 4 م0 و16% في درجة حرارة 37 م0 خلال فترة تخزين 12 يوم | The use of biodegradable nanoparticles as vaccine adjuvant with entrapped antigens represents an exciting approach for controlling the release of vaccine antigens and optimizing the desired immune response . Because of the natural components of nanoliposomes , we investigated the ability of prepared nanoliposomes , as a nanoadjuvant , to entrap soluble Leismania donovani antigens (SLAs) . The study was include preparation of SLA by parasite reactivation was carried out when inoculated into Rosewell park memorial institute media (RPMI) and incubated at 23 ̊ C for 4 days . Inoculum (104 promastigote / ml) of 4 days was used to inoculate modified medium of Saline - Neopeptone and Blood agar ( SNB) to produce promastigote mass . SLAs were extracted from the promastigotes ghost membrane after fourth passages of subculturing in SNB9 .The extracted SLAs then entrapped in nanoliposomes prepared freshly .Lipids mixture of 4mMPhosphatidylcholine, 2.2mM Cholesterol and 0.55mM Phosphatidylethanolamine in a ratio of 7 : 2 : 1 was depended in two nanoliposome preparation methods ; Chloroform injection and size exclusion chromatography . Physio - chemical characterizations of prepared nanoliposomes was performed by using Scanning Electron Microscope (SEM) , Atomic Force Microscope (AFM) ,Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) and Zeta Potential assays to determine the size , morphology , chemical active group and charge . Nanoliposomes prepared by chloroform injection method revealed non aggregate of negative nano vesicles with diameter of less than 75nm and PO2, CH2 and CH3 groups. The nanoliposomes entrapment efficiency (EE) to entrap SLAs was determined. The percentage of EE was 62, 50 and 27.5of SLAs entrapped nanoliposomes prepared by chloroform injection, Sephadex G25 and SephadexG75 , respectively .Moreover, stability of SLAs entrapped nanoliposomes was examined at 4 and 37 ̊ C storage temperature. SLAs entrapped nanoliposomes , prepared by chloroform injection method ,shown higher value of EE( 32 % ) at 4 ̊ C and(16%) at 37 ̊ C after 12 days of storage .
