دراسة وبائية بكتريا المكورات المعوية ENTEROCOCCI المقاومة للعديد من المضادات الميكروبية والمسببة للاصابات في بيئة المستشفيات == Epidemiological study of Multi - Antimicrobial resistant Enterococci that causes Nonsocomial Infections
Author name:
محمد حسن يونس محمد
Supervisor name:
مروان صالح محمد | خليل مصطفى خماس
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Doctorate
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3144 - p.pdf
Abstract:
في هذه الدراسة جمعت ( 637 ) عينة من مصادر مختلفة ( سريريه , سطوح بيئية , اجهزة طبية , مياه ) للفترة من تموز 2005 الى كانون الثاني 2006 وقد تم اخذ العينات من وحدة الديلزة في مستشفى بغداد ومن وحدة الناظور في مستشفى اليرموك ومن ردهة الاطفال في مستشفى ابن البلدي .استخدم نوعين من الاوساط الزرعية للعزل الاولي لبكتريا المكورات المعوية المقاومة للعديد من المضادات الحياتية وهما Bile aesculin azide agar وVancomycin resistant - enterococci agar .اعتمادا على الصفات المورفولوجية , المجهرية ,والفحص المصلي ( فحص التلازن بالشريحة ) , وفحص الكاتاليز , تم الحصول على 18 عزلة تمثل بكتريا المكورات المعوية المقاومة للعديد من المضادات الحياتية. واعتمادا على التشخيص بنظام ( Api - 20 Strept. Strip ) , اظهرت النتائج ان 13 عزلة من مجموع 18 عزلة ( 72% ) تعود الى النوع E.faecium و5 عزلات من مجموع 18 عزلة ( %28 ) تعود الى النوع E.feacalis .فحص الحساسية بطريقة الانتشار من الاقراص تجاه 10 انواع من المضادات الحياتية ( بنسيلين ج , الجنتامايسين , السايبروفلوكساسين , الكلورامفينيكول , تتراسايكلين , النايتروفيورانتون , الباستراسين ,اميبيم , اميكاسين ,حامض نالدكسك ) اظهرت العزلات مقاومة عالية ( 100% ) لخمسة من المضادات الحياتية (اميكاسين , نالدسك اسد, تتراسايكلين , الباستراسين , الجنتامايسين ) وبالتالي فهي مكورات معوية مقاومة للعديد من المضادات الحياتية .فحص الحساسية بطريقة المرق لتحديد التركيز المثبط الادنى تجاه 9 انواع من المضادات الحياتية ( الجنتامايسين , السايبروفلوكساسين , الكلورامفينيكول , النايتروفيورانتون , فانكومايسين , سيفالوثين , سيفتازديم , سيفيبيم , بنسيلين ج ) , اظهرت النتائج مقاومة عالية ( 100% ) لكل من سيفالوثين وبنسيلين ج ( ug/ml 32 < = MIC50 ) و(16 ug/ml < = MIC50 ) على التوالي . بينما اظهرت حساسية عالية لكل من النايتروفيورانتون والفانكومايسين ( ug/ml 128 < = MIC50 ) و(16 ug/ml < = MIC50 ) على التوالي .تم استخلاص البلازميدات بطريقة التحلل القاعدي المحورة لستة عزلات من مصادر مختلفة ومن نفس الردهة وبعد الكشف عنها بوساطة الترحيل الكهربائي في هلام الاكاروزاظهرت النتائج تشابه الحزم في الموقع والحجم ولكل العزلات .تم تحديد نقاوة الدنا البلازميدي بوساطة المطياف الضوئي حيث كان تركيزا لدنا لحاصل القسمة عند الطول الموجي 260 و280 هو ( 1.95 ) مما يدل على نقاوة الاستخلاص للدنا البلازميدي.دراسة امكانية استعمال ناتج عملية التضاعف لجين (vanA ) و( van B ) المشفرة لجين مقاومة الفانكومايسين وجين ( ddI ) المشفر لجين D - alanine - D - alanine ligase المشخص للنوع E.faecium بوساطة فحص تفاعل بوليميرازالسلسلي للدنا وبعد الترحيل لناتج التضاعف لثلاث جينات لوحظ ظهور حزمة مع الجين ddI عن الجين الخاص بتشخيص النوع E.faecium فقط | This work was done on 704 samples that were collected from many sources included patients, medical instruments, ecological surfaces and water samples from three hospitals in Baghdad .For primary isolation of Multi - Drug Resistant Enterococci , two media were used ( Bile aesculin azide agar,Vancomycin - resistant enterococci ).The isolates were exposed to microscopical, morphological, biochemical test ( especially PYR test,catalase test ), serological test ( slidex Strepto - D - Kit) which proved 18 samples as Multi - Drug Resistant Enterococci .Diagnosis by ( Api - 20 Strept.strip ) we determined 13 isolates from 18 isolates ( 72% ) are belonged to E.faecium,and 5 isolates from 18 isolates ( 28%) are belonged to E.Feacalis .the antibiotic susceptibility test by using disk diffusion method as well as the determination of minimal inhibitory concentration of several antibiotics carried upon these samples . the results showed that all samples were resistant to five antibiotics . the minimum inhibitory concentration ( MIC50) of cephalosporin, penicillin G , ciprofloxacin,cefepim, and ceftazidime was > 64 µg / ml.nitrofurantoin and vancomycin had MIC50 of 128 and 16 µg / ml respectively.Pure plasmid DNA was extracted from vancomycin resistant enterococci by the evidence of UV - spectrophotometer study .Agarose gel electrophoresis of plasmid isolated from vancomycin resistant related to different sources showed slight differences in the bands mobilization and gave negative results by Pulsed Field Gel Electrophoresis ( PFGE). Determined the genes of vancomycin resistant (vanA and vanB) in isolates by PCR , the results showed that all isolates gave negative results. The best culture medium used for isolate Multi - drug resistant enterococci is Bile aesculin azide agar . in clinical samples all isolates are E.faecium ,in environmental samples all isolates are E.Feacalis .High resistant to Cephalosporines and low resistant to nitrofurantoin .vanA and vanB genes were not detected in isolates by PCR. In this study were collected ( 637) samples from different sources ( clinical , ecological surfaces , medical instruments , water ) from July in 2005 to January in 2006 . samples taken from ( Dialysis unit in Baghdad hospital , Proctoscopy unit in ALyarmok hospital , Pediatric ward in Ibn - albaldi hospital).Used two types of culture media for primary isolation of Multi - drug resistant enterococci ( Bile aesculin azide agar , Vancomycin resistant enterococci agar).dependent on morphological , microscopical, serological test ( slide Strepto - D - Kit) and (PYR) test and catalase test , we obtained 18 isolates as Multi - drug resistant enterococci. dependent on diagnosis by ( API - 20 Strept.Strip ) . the results showed that 13 isolates from 18 isolates ( 72% ) are belonged to E.faecium, and 5 isolates from 18 isolates ( 28%) are belonged to E.fecalis .The susceptibility test by using disk diffusion method against 10 types of antibiotics(Penicilin G, Gentamicin , Chloramphenicol , Nitrofurantoin , Tetracyclin , Bacitracin , Amikacin , Imepem , Nalidix acid and Ciprofloxacin) .The isolate showed highly resistant (100%) to 5 antibiotics ( Gentamicin , Tetracyclin , , Bacitracin , Amikacin, Nalidix acid) and then the isolates are resistant to Multi - antibiotics.The susceptibility test by using broth dilution method to determine MIC against 9 types of antibiotics (Gentamicin , Penicilin G, Ciprofloxacin, Nitrofurantoin, Chloramphenicol,Cephalothin,Ceftazidime , Cefepime ,Vancomycin),The isolate showed highly resistant (100%) to Cephalothin and Penicillin G ( MIC50 = >32 ug/ml )and ( MIC50 = >16 ug/ml) sequencely The isolate showed low resistant to Nitrofurantoin and Vancomycin ( MIC50 = > 128 ug/ml) and (MIC50 = > 16 ug/ml)sequencely. Plasmid extraction by modified Alkaline analysis method for 6 isolates from different sources in same ward and after detected by agarose gel electrophoresis, the results showed the same plasmid bands in size and place for all isolates. We determined the purity of plasmid DNA by UV - Spectrophotometer which concentration of DNA for divided obtained at wave length 260 and 280 nm was ( 1.95) which indicate the purity of extraction of DNA. Study of using the product of amplication of( vanA) and (vanB) gene coded for vancomycin resistant gene and( ddI) gene coded for D - alanine - D - alanine ligase gene specific for E.faecium by Polymerase Chain Reaction for DNA and after detected the product of amplification of 3 genes, the results showed that isolates gave positive result for just (ddI) gene and negative for( vanA) and( vanB) gene.
