دراسة الاسهال المصاحب للمضادات الحيوية والتهاب القولون والمتسبب بجرثومة Clostridium difficile واستخدام خميرة Saccharomyces boulardii كمعزز حيوي في الوقاية والعلاج == Study of Antibiotic - Associated Diarrhea and Colitis caused by Clostridium difficile , and using Saccharomyces boulardii as a probiotic for the prevention and treatment
Author name:
لمى يوسف مهدي
Supervisor name:
منى تركي موسى الموسوي | سعد صباح فخري
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Doctorate
University:
University of Baghdad
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
24T3405 - p.pdf
Abstract:
شملت الدراسة 525 عينة براز لمرضى عراقيين مصابين بالاسهال والتهاب القولون المصاحبين للمضادات الحيوية من الراقدين في مستشفيات بغداد الذين كانوا تحت العلاج بالمضادات الحيوية واسعة الطيف ، فضلا عن اصحاء ظاهريا من اطفال(بعمر شهر فاقل الى 15 سنة) وبالغين(بعمر 16 سنة الى 61 سنة فاكثر) ، خلال الفترة من الاول من حزيران 2013 حتى نهاية ابريل 2014 . استبعدت 95 عينة اظهرت نتيجة موجبة للطفيليات والفطريات تجنبا لحدوث تداخلات في نتائج الدراسة . تم التحري عن بكتريا المطثية العسيرة Clostridium difficile (C.difficile)وذلك بعزلها وتشخيصها باستخدام وسط انتقائي، واجريت اختبارات مجهرية وكيموحيوية باستخدام نظامAPI 20 A system , كما فحصت حساسية العزلات للمضادات الحيوية. والكشف عن وجود السموم (ا وب( باستخدام تقنيةELISA وكشف جيناتهماtcdA وtcdB باستخدام تقنية PCR .واظهرت النتائج عزل وتشخيص75 (%17.44) عزلة من C.difficile من مجموع 430 عينة ، شملت 51 (21.3٪) عزلة من مجموع 240 عينة اطفال مرضى و12(15٪( عزلة من مجموع 80 عينة اطفال اصحاء ظاهريا ، اما من البالغين المرضى والاصحاء ظاهريا فكانت 11(15.7٪( عزلة من مجموع 70 و1(52.٪) عزلة من مجموع 40 على التوالي. اظهرت العزلات مقاومة عالية لكل من المضادات الحيوية ,Colistin, Nalidixic acid, Cefotaxime, gentamycin Clindamycin ciprofloxacin, Erythromycin, وAmpicillin ، وحساسية عالية لكل من Vancomycin وMetronidazol (100و 96(% على التوالي، مع حساسية جيدة للـ chloramphenicol.واظهرت جميع العينات الموجبة وجود سموم ( ا وب( باستخدام تقنية ELISA ، كما اظهرت جميع العزلات الموجبة احتواءها الجينات tcdA وtcdB باستخدام تقنية PCR .هدفت الدراسة ايضا استخدام خميرة Saccharomyces boulardii كمعزز حيوي خارج وداخل الجسم الحي للوقاية والعلاج من الاسهال والتـهاب القولون المصاحب للمضادات الحيوية والمستحث تجريبيا في فئران اصيبت بـC.difficile ، ومقارنة هذا التاثير مع التاثير العلاجي بالمضادات الحيوية. واظهرت النتائج كفاءة المعزز الحيوي في تثبيط نمو البكتريا خارج الجسم الحي والتقليل من التاثيرات النسيجية المرضية المصاحبة للاصابة بـ C.difficile من خلال الية التثبيط التنافسي داخل الجسم الحي .يستنتج من هذه الدراسة ان لخميرة S.boulardii تاثيرا ايجابيا لمنع وعلاج الاصابة بـ C.difficile من خلال احداث التوازن الميكروبي وتقليل او منع التاثيرات النسيجية المرضية الضارة للقولون ، وان هذا التاثير يكون احسن واكثر ايجابية في حالة الاستخدام المبكر والمستمر لهذه الخميرة , كما اثبتت الدراسة سلامة استخدام الخميرة كمعزز حيوي ، ومما تقدم اعلاه نوصي باستخدامها للوقاية والعلاج من الاسهال والتهاب القولون المصاحب للمضادات الحيوية . | A total of 525 stool samples were collected from patients with clinical symptoms of diarrhea and colitis with a history of antibiotics treatment from some hospitals in Baghdad .An apparently healthy children (one month to less than 15 years old) and adults (16 to 61 years and older) were involved in this study. Then investigation were carried out from June 2013 to April 2014. Ninety five samples were excluded from this study science they were contaminated by parasite and fungi . Clostridium difficile (C.difficile) were isolated and identified using selective media ,light microscope and biochemical tests using API 20 A system. All isolates were subjected to antibiotics resistance test. The presence of toxins : A and B were detected using ELISA technique ;while tcdA and tcdB genes were confirmed using PCR technique. The results showed isolate and diagnose 75 (17.44%) isolate of C.difficile out of 430 samples, including 51 (21.25%) isolate of a total 240 sample of children patients and 12 (15%) isolate of a total 80 sample of apparently healthy children, either from adult patients and apparently healthy were 11 (15.7%) isolate of a total 70 and 1 (2.5%) isolate of a total 40 respectively. Isolates showed high resistance for antibiotics : Colistin, Nalidixic acid, Cefotaxime, gentamycin Clindamycin ,ciprofloxacin, Erythromycin, and Ampicillin, and high sensitivity for Vancomycin and Metronidazol(100and 96)% respectively, with a good sensitivity to chloramphenicol . All the C.difficile positive samples showed presence of toxins (A and B) using ELISA technique, also all the positive isolates showed contain tcdA and tcdB genes by using PCR technique .The study also aimed to use the yeast Saccharomyces boulardii as probiotic in - vitro and in - vivo for the prevention and treatment of diarrhea and colitis associated with antibiotics and experimentally induced in mice that infected by C.difficile, and compared this effect with the therapeutic effect with antibiotics. The results showed efficiency of probiotic in the inhibition of bacterial growth in - vitro and reduce the pathological effects associated with C.difficile infection through competitive inhibition mechanism in - vivo.This study conclude that the S.boulardii have positive influence to prevent and treat C.difficile infection through the creation of microbial balance and reduce or prevent histopathological effects that harmful to the colon, and that this effect is better and more positive in the case of early and continued use of yeast. Besides that, this study proved the safety of S.boulardii as a probiotic and for all above it is recommended to be used for prevention and treatment of Antibiotic associated diarrhea and Colitis .
