الكشف عن انزيمات البيتا لاكتاميز واسعة الطيف المنتجة من بكتريا Klebsiella pneumoniae == Detection of extended spectrum ? - Lactmases producing Klebsiella pneumoniae
Author name:
بيداء مجبل علي حسن الخفاجي
Supervisor name:
خليل مصطفى خماس | سعد لعيبي حامد
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Enzymes
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
24T3223 - p.pdf
Abstract:
عزلت 46 عزلة تعود لبكتريا Klebsiella pneumoniaeمن عدة مستشفيات في مدينة بغداد للفترة مابين شهري تشرين الثاني 2012 وتموز 2013. تم الحصول على العزلات من مصادر سريرية مختلفة شملت : (23) عزلة من الدم و(19) عزلة من الادرار وعزلتان من الجروح وعزلة واحدة من كل من مسحة الاذن والقشع. تم اجراء فحص حساسية العزلات تجاه 15 مضاد جرثومي باستخدام جهاز Vitek 2 , وكان نمط مقاومة العزلات تجاه المضادات الجرثومية على النحو التالي : 100٪ للاموكسيسيلين، 82.6٪ للسيفازولين، 80.43٪ للسيفوتاكسيم، 78.26٪ لكل من للالسيفتازيديم وسيفيبيم، 73٪ للكوتريموكسازول، 45.65٪ للجنتاميسين، 30٪ لل نايتروفيورانتين، 17٪ لكل من للاموكسيسيلين / كلافيولانك اسد وبيبراسيلين / تازوبكتام، وسيبروفلوكساسين، 8.69٪ للسيفوكسيتين، و4.34٪ لكل من الاميبينيم والميروبينيم والاميكاسين. فضلا عن ان بعض العزلات قد اظهرت مقاومة متوسطة ضد المضادات الجرثومية المدروسة. اظهرت نتائج فحص الحساسية ان هناك نسبة عالية من المقاومة تجاه المضادات الجرثومية المدروسة, خاصة تجاه مجموعة السيفالوسبورينات والمضاد الجرثومي كو - ترايموكزول , في حين كانت المضادات الجرثومية الاكثر فاعلية هي مجموعة الكاربابنيمات والمضاد الحياتي الاميكاسين. اظهرت نتائج قابلية العزلات على انتاج انزيمات البيتالاكتاميز الواسعة الطيف بان 39 عزلة (84.78%) من بين العزلات قد اعطت نتيجة موجبة لهذا الفحص. استعملت تقنيه تفاعل البلمره الببتيدي ((PCR للكشف عن مدى انتشار الجينات blaTEM وblaSHV وblaCTX - M بين العزلات المنتجه لانزيمات البيتا لاكتاميز واسعه الطيف المسؤولة عن التشفير لهذه الانزيمات. كشفت نتائج تقنية PCR بان نسب انتشار blaTEM ، blaSHV ، وblaCTX - M كانت : 66.66 ٪ (26 عزله) وبناتج مضخم ذو حجم جزيئي 448 زوج قاعدة ، 69.23 ٪ (27عزلة) وبناتج مضخم ذو حجم جزيئي 231 زوج قاعدة و82.05 ٪ (32 عزلة) وبناتج مضخم ذو حجم جزيئي 551 زوج قاعدة على الترتيب. اظهرت نتائج الدراسة الحالية ان عدد العزلات الحاملة للجينات الثلاثة blaTEM وblaSHV وblaCTX - M سوية كانت 16 عزلة ( 34.78 ٪ ) ، في حين وجد ان عدد العزلات التي تحمل كلا من الجينين blaTEM وblaCTX - M, blaSHV وblaCTX - M وblaSHVو blaTEM سوية كانت 10 عزلات ( 21.73 ٪ ), 7 عزلات ( 51.21 ٪ ) وعزلتان( 4.34 ٪ ) على الترتيب . بينما كانت نسبة 10.86 ٪ من العزلات المدروسة حاوية على الجين blaSHV لوحده , و6.52٪ من العزلات كانت تمتلك فقط الجين .blaCTX - M لم تظهر النتائج وجود الجين blaTEM لوحده في اي من العزلات قيد الدراسة. اظهرت النتائج المستحصلة من بيانات نتائج تسلسل الناتج المضخم من تقنية PCR وجود نسبة مطابقة تراوحت مابين ( (100 - 99٪ مع الطراز الوراثي blaCTX - M - 15 ونسبة مطابقة تراوحت مابين ( 98 - 100 ) ٪ مع الطراز الوراثي blaSHV - 11. بينت نتائج هذا الاختبار سيادة الطرز الوراثية blaSHV - 11 وblaCTX - M - 15 بين عزلات بكتريا K. pneumoniae المنتجة لانزيمات البيتا لاكتاميز واسعه الطيف. | Forty - six Klebsiella pneumoniae isolates were isolated from some hospitals of Baghdad between November 2012 and July 2013. The isolates were obtained from various clinical specimens including : blood (23) isolates, urine (19) isolates, wounds (2)isolates, ear swab(1)isolates, and sputum(1) isolates. Antimicrobial susceptibility test was carried out towards 15 antimicrobials using Vitek 2 compact system, and the pattern of resistance was as follow : 100% for amoxicillin, 82.6% for cefazolin, 80.43% for cefotaxime, 78.26% for ceftazidime and cefepime, 73% for co - trimoxazole, 45.65% for gentamicin, 30% for nitrfurantoin, 17% for amoxicillin/clavulanic acid, pipracilli/tazobactam, and ciprofloxacin, (for each) 8.69% for cefoxitin, and 4.34% for imipenem, meropenem, and amikacin. In addition to some isolates were revealed intermediate resistance against some antimicrobials. Results of antimicrobials susceptibility tests has been revealed high percentage of resistance for antimicrobials studied, especially for cephalosporins and co - trimoxazole, while the most effective antimicrobials were carbapenems and amikacin. The results of capability of isolates to produce extended - spectrum β - lactamases (ESBLs) showed that thirty - nine of isolates (84.78%) were given positive result.ESBLs - producing K. pneumoniae (39) isolates were subjected to polymerase chain reaction (PCR) amplification technique to identify the prevalence of blaTEM, blaSHV, and blaCTX - M genes that responsible for β - lactame expression. Results revealed the prevalence of blaTEM, blaSHV, and blaCTX - M were : 26(66.66%) isolates with 448 bp amplified product, 27(69.23%) isolates with 231 bp amplified product, and 32(82.05%) isolates with 551 bp amplified product respectively.The results of present study were showed that presence of three genes - blaTEM,,blaSHV, and blaCTX - M together were in 16 isolates(34.78%), while combinations between blaTEM and blaCTX - M , blaSHV and blaCTX - M , and between blaTEM and blaSHV were found in 10 isolates(21.73%),7 isolates(15.21%), and 2 isolates(4.34%) respectively. While 10.86% of studied isolates contains only blaSHV gene, and 6.52% has only bla CTX - M none of studied isolates were carried blaTEM aloneThe data of the sequencing of PCR products were revealed (99 - 100) % homology with the blaCTX - M - 15 genotype and (98 - 100) % homology with the blaSHV - 11genotype. Results have been shown the dominance of blaSHV - 11 and blaCTX - M - 15 among ESBLs - producing strains.
