دراسة مناعية ووراثية لداء السكري النوع الاول في عينة من المرضى العراقيين == Immunological and genetic study of type I diabetes mellitus in a sample of Iraqi patients
Author name:
انور عبد ناصر
Supervisor name:
احسان عرفان حسين | حازمة موسى خميل
General topic:
Biology
Specific topic:
zoology - Genetics
Degree:
Master
University:
University of Baghdad
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3207 - p.pdf
Abstract:
شملت الدراسة على 50 عينة دم ماخوذة من اطفال تراوح متوسط اعمارهم من 7 - 12 سنة, كان منها 35 (18 ذكور, 17 اناث) عينة دم لاطفال مصابين بداء السكري - النوع الاول Type 1 Diabetes Mellitus (T1D), وعلى 15 (9 ذكور, 6 اناث) عينة دم لاطفال اصحاء التي عدت كعينة قياسية. قدر تركيز بعض الحركيات الخلوية بادئة الالتهاب في مصل العينات المدروسة التي شملت IFN - γ وIL - 17, وبعض الحركيات الخلوية مضادة للالتهاب وشملت IL - 4، IL - 10 وTGF - β1, وباستعمال تقانة الاليزا ELISA. اظهرت النتائج تراكيز عالية من الحركي الخلوي IFN - γ في مصل المصابين بداء السكري - النوع الاول، اذ بلغ تركيزه 1.575 بيكوغرام/مليلتر بالمقارنة مع 0.921 بيكوغرام/مليلتر لدى العينة القياسية. اظهرت نتائج التحليل الاحصائي باستعمال اختبار Mann - Whitney U وجود فروق معنوية في هذا الحركي الخلوي بين الاطفال المصابين والعينة القياسية وتحت مستوى احتمالية P<0.05. اظهرت النتائج ايضا انخفاضا في تركيز الحركي الخلوي IL - 17A في مصل المصابين بالمقارنة مع العينة القياسية, اذ بلغ التركيز في مصل دم المصابين 0.010 بيكوغرام/مليلتر، بينما كان تركيزه في العينة القياسية 0.029 بيكوغرام/مليلتر. اظهرت النتائج انخفاضا في تركيز الحركي الخلوي IL - 4 في مصل المصابين بالمقارنة مع العينة القياسية, اذ بلغ التركيز في مصل دم المصابين 0.015 بيكوغرام/مليلتر، بينما كان تركيزه في العينة القياسية 0.021 بيكوغرام/مليلتر, كما اظهرت النتائج انخفاضا في تركيز الحركي الخلوي IL - 10 في مصل دم المصابين بالمقارنة مع العينة القياسية, اذ بلغ متوسط التركيز في مصل دم المصابين 0.068 بيكوغرام/مليلتر، بينما كان تركيزه في العينة القياسية 0.111 بيكوغرام/مليلتر. بينت النتائج ارتفاعا ملحوظا في تركيز الحركي الخلوي TGF - β1 في مصل المصابين بالمقارنة مع العينة القياسية, اذ بلغ متوسط التركيز في مصل دم المصابين 1.659 بيكوغرام/مليلتر، بينما كان تركيزه في العينة القياسية 0.444 بيكوغرام/مليلتر. اظهره نتائج التحليل الاحصائي وجود فروق معنوية في تركيز TGF - β1 بين كلا العينتين وتحت مستوى احتمالية P<0.05. اشارت نتائج قيم معامل الارتباط باستعمال تحليل Pearson Correlation بين الحركيات الخلوية المدروسة الى وجود فروق معنوية في بعض الحركيات الخلوية, بينما لم تظهر وجود اية فروق معنوية في الحركيات الخلوية الاخرى. اظهر التعدد الشكلي لجين IFN - γ T/A +874 المتضخم باستعمال تقانة نظام الممانعة للتضخيم Amplification refractory mutation system (ARMS - PCR) نسبة اعلى من تكرار الاليل t في عينة المصابين بالمقارنة مع تكرار الاليل a، بينما سجل الاليل t نسبة اعلى من الاليل a في العينة القياسية. ظهر الاليل a كاليل مسبب Etiological faction (EF) بلغت قيمته 0.451, ومرتبط مع المرض في عينة المصابين، بينما ظهر الاليل t كاليل وقائي من المرض Preventive faction (PF) وبلغت قيمته 0.299. اظهرت نتائج التحليل الاحصائي للنمط الوراثي TT نسبة اعلى لدى العينة القياسية بالمقارنة مع عينة المصابين بداء السكري - النوع الاول, وظهر هذا النمط كنمط وراثي وقائي من خطر الاصابة بداء السكري, وظهر النمطان الوراثيان TA وAA كنمطين وراثيين مرتبطين مع خطر الاصابة بداء السكري. اظهرت نتائج الترحيل الكهربائي وجود الجينين IL - 17A وIL - 17 - F في عينة المصابين بداء السكري - النوع الاول والعينات القياسية, ولعدم توفر الانزيمات القاطعة والوقت الكافي لم تتم دراسة التعدد الشكلي لهذه الجينات. اظهر التعدد الشكلي لجين IL - 4 - 590 (C˃T) المتضخم باستعمال تقانة ARMS - PCR نسبة اعلى من الاليل c في عينة المصابين بالمقارنة مع الاليل t وظهر الاليل c كاليل مسبب مرتبط مع خطر الاصابة بالمرض، بينما سجل الاليل t نسبة اعلى من الاليل c في العينة القياسية، وظهر الاليل t كاليل وقائي من المرض. اظهر النمطان الوراثيان TT وTC كنمطين مرتبطين مع الجزء الوقائي من خطر الاصابة بداء السكري - النوع الاول وظهر النمط الوراثي CC كنمط وراثي مرتبط مع خطر الاصابة بداء السكري - النوع الاول. كشف عن محث الجين 10IL - في الموقعين - 592 و- 1082 في عينة المصابين بداء السكري - النوع الاول والعينة القياسية، واظهرت النتائج وجود هذين الموقعين في محث الجين IL - 10 في جميع العينات المدروسة. اظهرت نتائج التعدد الشكلي للجين TGF - β1 في الموقع Codon 10 : +869*C/T بان الاليل t كاليل مسبب ومرتبط مع المرض, بينما اظهر الاليل c كاليل وقائي من خطر الاصابة بالمرض. وظهر النمطان الوراثيان TT وCC كانماط وراثية مسببة ومرتبطة مع خطر الاصابة بداء السكري, بينما ظهر النمط الوراثي CT كنمط وراثي مرتبط مع الجزء الوقائي من المرض. بينت نتائج التعدد الشكلي للجين TGF - β1 في الموقع Codon 25 : +915*G/C بان الاليل g ظهر كاليل مسبب ومرتبط مع خطر الاصابة, بينما ظهر الاليل c كاليل وقائي من المرض. ظهر النمط GG كنمط وراثي مرتبط مع خطر الاصابة بداء السكري - النوع الاول, بينما لم يظهر النمطان الوراثيان GC وCC اي ارتباط معنوي مع المصابين بداء السكري - النوع الاول, وكان نمطان مرتبطين مع الجزء الوقائي من خطر الاصابة بالمرض. نتائج التسلسل التتابعي لمحث الجين IL - 10 في الموقعين الطافرين - 592 و- 1082 قد سجلت العديد من الطفرات الجينية من نوع الاضافة، الحذف والاستبدال مع نسبة عالية من النوع الاخير من الطفرات الجينية في جميع العينات المدروسة ولكلا الموقعين. | This study was included 50 blood serum samples were collected from children with age ranged between 7 - 12 years. Thirty five samples collected from children with Type 1 Diabetes Mellitus (T1D), and 15 blood serum samples collected from healthy children as a control sample. The concentrations of some pro - inflammatory interleukins like IFN - γ and IL - 17 were detected. Anti - inflammatory interleukins like IL - 4, IL - 10 and TGF - β were also detected by using Elisa instrument. The results revealed high concentrations of IFN - γ in T1D patient’s blood serum with 1.575 Pg/ml in comparison with 0.921 Pg/ml in control sample. The statistically results by using Mann - Whitney U test revealed significant differences between T1D patients and control samples. The results also revealed decreasing in IL - 17 concentrations in T1D patient’s blood serum with 0.010 Pg/ml in comparison with the control sample with 0.029 Pg/ml. No significant differences were detected in concentration of this interleukin between the studied samples when they analyzed with the same statistical test. The results showed increasing in TGF - β concentration in T1D patient’s blood serum in comparison with the control sample. The concentration was 1.659 Pg/ml in patients, whereas the concentration of TGF - β in control sample was 0.444 Pg/ml. The results of Mann - Whitney U test showed significant differences in TGF - β concentrations between both samples. The results revealed decreasing in IL - 4 concentration in blood serum of T1D patients in comparison with the control sample. The concentration was 0.015 Pg/ml in patients, whereas the concentration of IL - 4 in control sample was 0.021 Pg/ml. No significant differences were found in concentration of this interleukin between the studied samples when they analyzed with the same statistical test. The results also revealed decreasing in IL - 10 concentration in T1D patient’s blood serum in comparison with the control sample, with 0.068 Pg/ml in patient sample and 0.111 Pg/ml in control sample. No significant differences were found in concentration of this interleukin between the studied samples when they analyzed with the Mann - Whitney U test. The results of correlation coefficients by using Person Correlation test between the studied interleukins showed significant differences among some interleukins, but no significant differences were detected with the other interleukins. The polymorphism of IFN - γ T/A +874 gene, which amplified by using amplification refractory mutation system (ARMS - PCR) was showed increasing in T allele frequency of T1D patients in comparison with the A allele frequency, whereas the T allele frequency was higher from the A allele frequency in control sample. The A allele revealed as Etiological faction (EF) and correlated with the disease in T1D patients sample, whereas the T allele revealed as Preventive faction (PF). The TT genotype showed higher percentage in control sample in comparison with T1D patients sample when Hardy - Weinberg equilibrium was used, and this genotype revealed as preventive faction from infection by this disease. The TA and AA genotypes revealed as etiological faction with risk by having this disease. The gel electrophoresis of IL - 17A and IL - 17F genes revealed the presence of both genes in all studied samples. The polymorphism of IL - 4 - 592 (C>T) gene which amplified by ARMS - PCR technique was showed high C allele frequency in T1D patients sample in comparison with T allele frequency, and the C allele revealed as etiological faction with risk by having this disease, whereas the T allele showed high frequency from the C allele frequency in control sample, and the T allele revealed as preventive faction from infection by this disease. The TT and TC genotypes revealed as preventive faction from infection by this disease, whereas the CC genotype revealed as etiological faction with risk by having this disease. The promoter of IL - 10 gene in - 592 and - 1082 positions were detected in both of the studied samples. The results of polymorphism of TGF - β1 gene in Codon 10 : +869*C/T position showed that the T allele revealed as etiological faction with risk by having this disease, whereas the C allele revealed as preventive faction from infection by this disease. The TT and CC genotypes revealed as etiological faction with risk by having this disease, whereas the CT genotype revealed as preventive faction from infection by this disease. The results of polymorphism of TGF - β1 gene in Codon 25 : +915*G/C position showed that the G allele revealed as etiological faction with risk by having this disease, whereas the C allele revealed as preventive faction from infection by this disease. The GG genotype revealed as etiological faction with risk by having this disease, whereas the GC and CC genotypes showed no significant correlation with the T1D disease, and these genotypes revealed as preventive faction from infection by this disease. The DNA sequences of the IL - 10 gene promoter were recorded many gene mutations with addition, deletion and substitution types, with high percentage of the last type of gene mutations in all of the studied samples and for both - 592 and - 1082 positions.
