دراسة بكتريولوجية وجزيئية لبكتريا المكورات العنقودية المعزولة من عينات سريرية == Bacteriological and Molecular Study of Staphylococcus spp. Isolated from Clinical Specimen
Author name:
هبة خلف ياسين المطوري
Supervisor name:
ميساء صالح مهدي الشكري | هدى هادي الحسناوي
General topic:
Medicine
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
University of Babylon - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Babylon
First pages:
19T1697 - p.pdf
Abstract:
تم في هذه الدراسة جمع 100 عينة سريرية مختلفة لمرضى راجعوا مستشفى الحلة التعليمي خلال الفترة من تشرين الثاني 2015 الى شباط 2016 م. العينات شملت (43%) عينة من الادرار, (26%) من الحروق, (20%) من الجروح و(11%)من الاذن، ثم زرعت العينات التي تم الحصول عليها على اوساط انتقائية واجريت عليها اختبارات بايوكيميائية وبكتريولوجية من اجل التشخيص. من مجموع 100 عينة تم الحصول على24 (24%) عزلة مكورات عنقودية ذهبية و8 (8%) عزله مكورات عنقودية بشرويه. تم التحري عن حساسية العزلات للمضادات الحياتية باستخدام طريقة انشار القرص. وقد وجد ان هذه العزلات كانت مقاومة لاكثر من نوع من المضادات الحيوية. فقد بينت النتائج ان كل عزلات المكورات العنقودية الذهبية (100%) مقاومة ﻠ ampicillin وvancomycin ، و93.1% منهم اعطت مقاومة ﻠ amoxyclave و(87.5%) منهم اعطت مقاومة ﻠ cefoxitin, cefepim، في حين كانت العزلات المقاومة ﻟ (oxacillinو ceftriaxone وmeropenem وamikacin وtetracycline وchloramphenicol) (41.6%)، (95.8%)، (70.8%)، (33.3%)، (62.5%) و(12.5%) على التوالي، وكانت نسبة المقاومة ﻠimipenem وrifampicin (75%) لكل منهما، ونسبة (20.5%) لكل من gentamycin) وnorfloxacin). بينما كانت كل عزلات المكورات العنقودية البشرويه (100%) مقاومة ﻠ cefoxitin وvancomycin، و(50%) منهم اعطت مقاومة ﻠ oxacillin وnorfloxacin وchloramphenicol، وكانت نسبة المقاومة ﻠ ceftriaxoneو imipenem وtetracycline وrifampicin (87.5%) لكل منهم , واخيرا كانت المقاومة ﻠ amoxyclaveوampicillin cefepime وmeropenemو gentamycin وamikacin (93.1%), (75%), (70%), (62.5%), (12.5%), (37.5%) على التوالي. اظهرت النتائج ايضا ان من مجموع 24 عزلة 21(87.5%)منها كانت مقاومة للاوكساسيلين واعتبرت المكورات العنقودية مقاومة للميثيسلين كونها مقاومة للاوكساسيلين وسيفوكسيتين. وقد اظهرت النتائج ان 37.5% من عزلات المكورات العنقودية المقاومة للميثيسلين كانت في عينات الادرار, و50% في عينات الحروق والجروح. تم دراسة بعض عوامل الضراوة واظهرت النتائج ان جميع عزلات المكورات العنقودية 32(100%) لها قابلية الالتصاق على الخلايا الظهارية , وشخص تكوين الاغشية الحيوية بواسطة طريقتين : طريقة الانبوب (TM) وطريقة الطبق الزرعي النسيجي (TCP) فكانت النتائج كالاتي : وجد ان في طريقة الانبوب كانت جميع عزلات المكورات العنقودية الذهبية منتجة للاغشية الحيوية و4(50%) من عزلات المكورات العنقودية البشروية منتجة للاغشية الحيوية و4 (50%) غير منتجة للاغشية الحيوية, بينما في طريقة الطبق الزرعي النسيجي وجد ان جميع العزلات منتجة للاغشية الحيوية من النوع القوي حسب قيم OD at 570nm . تم دراسة تاثير بعض استخلاصات النباتات على تكوين الاغشية الحيوية (الشاي الاخضر والاسود) واظهرت النتائج ان قابلية تكوين الاغشية الحيوية في جميع عزلات المكورات العنقودية ثبطت بعد اضافة الشاي ما عادة (7) عزلات ازداد بها تكوين الاغشية الحيوية. تم الكشف عن الجينات المسؤولة عن بعض عوامل الضراوة باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) فكانت النتيجة لعزلات المكورات العنقودية الذهبية لجين, sar, icaD, icaC, icaB, icaA atl, agr mecA, بنسبة وعدد 23 (95.8%) , 22 (91.6%), 11(45.8%), 23 (95.8%), 15 (62.5%), 17 (70.8%), 22 (91.6%) و12 (50%),على التوالي. وكانت نسبة عزلات المكورات العنقودية البشروية للجينات, icaD, icaC, icaB, icaA atl 7 (87.5%), 7(87.5%), 4(50%), 8(100%), 7(87.5%) على التوالي, بينما اعطت نتيجة سالبة لجين mecA . | A total of 100 different clinical specimen were collected from patients who admitted to Hilla Teaching Hospital, during a period extending from November 2015 to February 2016. The specimens included (43) urine specimen, (26) burns, (20) wounds and (11) ear swabs. Then the specimens cultured in selective media and identified by using biochemical tests. Out of 100 specimens, a total of 24 (24%) Staphylococcus aureus and 8 (8%) of S. epidermidis isolates were recovered. Antibiotic susceptibility to a variety of antibiotics has been investigated by using disk diffusion method. It has been found that these isolates have been resistant to more than one antibiotic. It has been found that S. aureus isolates were resistant(100%) to ampicillin and vancomycin, amoxiclave(93.1%) and showed (87.5%) resistance to cefoxitin and cefepime, whereas the isolates were resistance to oxacillin, ceftriaxone, meropenem, amikacin, tetracycline and chloramphenicol at (41.6%), (95.8%), (70.8%), (33.3%), (62.5%)and (12.5%) respectively. While showed resistance (75%) to imipenem and rifampicin for each, gentamycin and norfloxacin at (20.5%) for each. Staphylococcus epidermidis isolates appeared resistance to cefoxitin and vancomycin (100%) for each, and (50%) for oxacillin, norfloxacin and chloramphenicol, while have resistance to ceftriaxone, imipenem, tetracycline and rifampicin at (87.5%) for each. Whereas the isolates were resistant to amoxyclave, ampicillin, cefepime, meropenem, gentamycin and amikacin at (93.1%), (70%), (75%), (62.5%), (12.5%), and (37.5%) respectively. Results also revealed that out of 24 of S. aureus isolates 21(87.5%) were assigned as methicillin - resistant Staphylococcus aureus (MRSA) phenotypically by using oxacillin and cefoxitin discs as these isolates showed resistance to both oxacillin and cefoxitin, and these MRSA isolates were distributed as 37.5% from urine and 50% from burns and wounds specimen. Some virulence factors of all Staphylococcal spp. isolates were studied, and the results showed that all Staphylococcal spp. isolates 32(100%) have the ability for adherence to epithelial cell. Biofilm formation was detected by tube method and tissue culture plate technique, in tube method(TM) the results showed that all S. aureus isolates (100%) were biofilm producers while 4(50%) of S. epidermidis isolates were biofilm producer and 4(50%) were not biofilm producer, in contrast to tissue culture plate (TCP) the result showed that all Staphylococcal spp. isolates were produce strong biofilm according to the absorbance at OD 570nm. The effect of some plants extracts on biofilm formation was studied, in the present study green and black tea were used to show the effect of these plant on biofilm formation, the results revealed that biofilm ability for all isolates has been inhibited except (7) isolates of S. aureus increased in biofilm formation. Polymerase chain reaction (PCR) were used for detection of virulence genes of Staphylococcus spp. isolates, it was found that S. aureus gave positive results for icaA, icaB, icaC, icaD, agr, sar, atl and mecA with number and percentage 23(95.8%), 22(91.6%), 11(45.8%), 23(95.8%), 17(70.8%), 15(62.5%), 22(91.6%) and 12(50%), respectively. While S. epidermidis gave positive result for icaA, icaB, icaC, icaD and atl genes at 7(87.5%), 7(87.5%), 4(50%),8(100%) and 7(87.5%), respectively, and all S. epidermidis isolates gave negative results to mecA gene.
