مقارنة وراثية وبكتريولوجية بين Staphylococcus spp. وStreptococcus spp. المقاومة لمضادات الــ Macrolide والمعزولة من اصابات سريرية مختلفة == Genetic and Bacteriological Comparative between Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. resistance to Macrolide , isolated from different clinical infections
Author name:
سيف علي محمد الحيالي
Supervisor name:
هادي رحمن رشيد الطائي
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
University of Diyala - College Of Education For Pure Sciences - Department Of Biology
Language:
Arabic
University location:
Diyala
First pages:
24T3120 - p.pdf
Abstract:
جمعت 200 عينة من مصادرمتنوعة شملت ( الادرار، والدم ، ومسحات الاذن الوسطى ، والقشع ، والجروح ، والبلعوم ، ومسحات مهبلية ) من مستشفيات ( بعقوبة العام ، البتول للولادة ، وبلدروز العام ) بالاضافة الى بعض المراكز الصحية وذلك للفتره من 1/ 9 / 2013 لغاية 1 /1 /2014 ، حيث اظهرت 75 عينة وبنسبة (37.5%) نموا سالبا للزرع البكتيري و125 عينة (62.5%) نموا موجبا للزرع البكتيري . تم الحصول على 40 عزلة تعود للجنسين Staphylococcus spp. وStreptococcus spp . اذ شخصت العزلات باستخدام الاختبارات الزرعية , والمجهرية , والكيموحياتية فضلا عن الفحص التاكيدي للعزلات باستخدام نظام api 20 staph and strep . وصلت نسبة Staphylococcus المعزولة من الدم الى 33.3% ومن الادرار 12.6% ومن البلعوم 36% ، ومن الاذن الوسطى 13.8% ، ومن الجروح 18.7% ، اما نسبة Streptococcus المعزولة من البلعوم فكانت نسبتها 30.7% ، ومن القشع 11.7% ، ومن الجروح 6.2% . تم اختبار حساسية جميع العزلات لبعض مضادات الـــ Macrolide الشائعة الاستخدام بالاضافة الى مضاد الكلندامايسين العائد لعائلة الــ Lincosamides ، اظهرت النتائج ان مقاومة S. aureus للارثرومايسين وصلت الى نسبة 50% ، وللازيثرومايسين بنسبة 45% ، وللكلندمايسين بنسبة 25% . اما S. epidermidis فقد كانت النسب كالتالي 66.6% للارثرومايسين و44.4% للازيثرومايسين ، و11.11% للكلندامايسين . اما بالنسبة للجنس S.pyogenes فكانت نسب المقاومة كالتالي 25.5% للارثرومايسين ، و25.5% للازيثرومايسين ، و14.5% للكلندامايسين . تم تحديد التركيز المثبط الادنى لمضاد الارثرومايسين للعزلات قيد الدراسة والتي اظهرت مقاومة تجاه هذا المضاد في فحص الحساسية بطريقة الاقراص (المقاومة) حيث تراوحت قيم MIC للعزلات بين (<64 - 32) مايكروغرام / مل . تم التحري عن قابلية عزلات Staphylococcus spp . و. Streptococcus spp على انتاج بعض عوامل الضراوة وقد اظهرت النتائج ان تلك العزلات كانت منتجة لعدة انواع من الانزيمات والذيفانات التي تسهم عادة في امراضيتها ومن هذه الانزيمات انزيم البروتييز، واللايبيز ، واليوريز، والانزيم المحلل للدنا ، والستافيلوكاينيز ، والستربتوكاينيز وكذلك اظهرت هذه العزلات قدرتها على انتاج اربعة انواع من الهيمولايسين (الفا ، بيتا ، كاما ، ودلتا). كما وتم التحري عن قابلية العزلات على انتاج الطبقة اللزجة Slime layer باستخدام طريقة اكار احمر الكونغـو وقد بينت النتائج ان كلا الجنسين لها القدرة على انتاج الطبقة اللزجة فقد اظهرت النتائج ان (65% ) من عزلات بكتريا S. aureus منتجة للطبقة اللزجة بينما كانت جميع عزلات S.epidermidis وبنسبة %100 منتجة للطبقة اللزجة ، بينما اظهرت 75% من عزلات S.pyogens قدرتها على انتاج الطبقة اللزجة . اجريت عملية استخلاص للدنا الكلي البكتيري لـ ( 12 ) عزلة ثم اجري تفاعل البلمرة المتسلسل PCR لعزلات Staphylococcus spp. وStreptococcuss spp. المقاومة للـ Mcrolide وذات MIC اكثر من64 مايكروغرام/ مل والموجبة النمو على الوسط المعلم بالارثرومايسين من خلال استعمال البوادىء المتخصصة التي تستهدف التسلسل النوعي للجين erm A وmef A ، رحلت نواتج التضاعف على هلام الاكاروز بتركيز 1% ولوحظ ظهور حزمة واحدة في جميع المسارات في الهلام بالمستوى نفسه بالنسبة للجينين . اظهرت النتائج ان نسبة وجود الجين erm A في عزلات S. aureus وصل الى 80% وفي عزلات S.epidermidis 30% ، وفي عزلات S.pyogens وصلت النسبة الى 50% ، اما بالنسبة للجين mef A فكانت نسبة توافره في عزلات S. aureus 20% ، وفي عزلات S.epidermidis 40% ، وفي عزلات S.pyogens 50% . | Collected 200 samples from different clinical sources included (Urine , blood , middle ear , sputum, throat , wounds , and vaginal swabs) from hospitals (Baquba teaching hospital , AL - Batool hospital and Balad Ruz teaching hospital) in addition to some health centers for the period from 1 / 9 / 2013 until 01 / 01 / 2014. As demonstrated 75 samples 37.5% were negative growth for bacterial culture and 125 62.5% positive growth of bacterial culture . 40 isolates belonging were obtained to both genus Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. These isolated were diagnosed by using cultural tests , microscopic, and biochemical characteristics as well as a confirmatory test for the isolates using the api 20 staph & strep system . The percentage of Staphylococcus isolated from the blood is 33.3% the urine 12.6% the throat 36% , middle ear 13.8% , and the wounds 18.7%, while the percentage of Streptococcus isolated from the throat was represented 30.7% , the sputum 11.7% , and the wonds 6.2%. Antibiotic susceptibility testing was performed on all isolates against some of the commonly used Macrolide members in addition to the clindamycin return to the lincosamides family using the disk diffusion method , the results showed that the resistance of S. aureus to erythromycin reached to 50% , for azithromycin 45% , and for clindamycin is 25% . The S. epidermidis ratios were as follows 66.6% for erythromycin 44.4% for azithromycin , and 11.11% of the clindamycin ، while the resistant of S.pyogens were as follows 12.5% of erythromycin , 12.5% of the azithromycin , and 14.5% of the clindamycin . The minimum inhibitory concentration MIC for erythomycin of isolates under study which showed resistance to the antibiotic sensitivity test in a Disk diffusion method where ranged between <33 - 64 µg / mL . investigated the ability of Staphylococcus spp. and Streptococcus spp on the production of some of the virulence factors . The results showed that these isolates were productive for several types of enzymes and toxins that contribute usually in pathogenicity. One of these enzymes , protease enzyme , lipase enzyme , urease enzyme , Dnase enzyme , Staphylokinase enzyme , and Streptokinase enzyme and also showed these isolates ability to produce Four types of Heamolysin (alpha , beta , gamma , and Delta) . It also has been investigating the susceptibility of isolates to produce a Slime layer using the Congo red agar ( CRA) ، The results showed that both genus have the ability to produce slime layer and Biofilm formation , the results showed that 65% of the S. aureus producing Slime layer while all S.epidermidis isolates produced the slime layer , while showed 75% of the isolates S.pyogens ability to produce Slime layer. Conducted the process of total DNA extraction to 12 isolates under study that resist Macrolide members . polymerase chain reaction (PCR) was done for isolates of the bacterium Staphylococcus and S.pyogens resistance of Mcrolide and with MIC more than 64 micrograms / ml by using specialized primers targeting sequence specific gene erm A and mef A , deported outputs doubling the agarose gel concentration 1% and observed the emergence of a single package in all the tracks in the gel at the same level for the genes . The results showed that the percent of the presence of erm A gene in isolates of S. aureus arrived 80% and in isolates S.epidermidis 30% , and in isolates S.pyogens got to 50% , while for mef A gene the presence in isolates of S. aureus was 20% , in isolates S.epidermidis 40% , and in isolates S.pyogens 50% .
