جينات تحسس الزحام وعلاقتها مع بعض عوامل الضراوه في بكتريا الزوائف الزنجاريه == Correlation of Quorum Sensing Genes with Some Virulence Factors in Pseudomonas aeruginosa
Author name:
دعاء كاظم منصورالموسوي
Supervisor name:
منعم رضوان علي
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
University of Baghdad
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
24T3254 - p.pdf
Abstract:
جمعت 60 عزله من البكتريا السالبه لصبغه كرام مشخصه مبدئيا بانها بكتريا الزوائف الزنجاريه من عده مستشفيات في بغداد ومنها مستشفى ابن البلدي ومستشفى الحروق ومستشفى بغداد التعليمي وكذلك من المختبرات التعليميه في مدينه الطب خلال الفتره من بدايه شهر ايلول لغايه نهايه شهر كانون الاول لسنه 2013 تضمنت هذه العزلات22 عزله من خمجات الحروق و18 عزله من خمجات الجروح و9عزلات من عينات القشع لمرضى مصابين باصابات الجهاز التنفسي و6 عزلات من الدم وعزلتين من خمجات المجاري البوليه و3عزلات من مسحات الاذن. شخصت العزلات مبدئيا بزراعتها على وسط الماكونكي الصلب ووسط الدم الصلب وكذلك وسط السيدوموناس الصلب بعد ذلك تم اجراء بعض الفحوصات البايوكيميائيه مثل فحص الكاتليز والاوكسيديز تبع ذلك تشخيص العزلات جينيا باستخدام تفاعل البلمره التسلسلي باعتماد جين .rpsL اكدت النتائج ان جميع العزلات قيد الدراسه هي بكتريا الزوائف الزنجاريه . خضعت 60 عزله عائده لبكتريا الزوائف الزنجاريه لاختبارفحص الحساسيه تجاه 12 مضادا حيويا بطريقه الانتشار واظهرت النتائج وجود مقاومه عاليه بين عزلات الدراسه لـــمضادات Tetracycline (100%) ,Ceftazidime (100%) ,Cefoxitin (100%) , Ceftriaxone (85 %) , Cefepeme (83.3%), Amoxillin/Clavulanic acid (81.6 %),Chloramphenicol (78.3 %) وانها كانت ذات مقاومه متوسطه لمضاد51.6%) Pipracillin ) وذات مقاومه واطئه لمضادات Tobramycin(33.3%), Norfloxacin (31.6%), Azithromycin (31.6%),Ciprofloxacin (28.3%). اختبرت قابليه العزلات على انتاج الغشاء الحيوي باستخدام طريقه احمر - الكونغو وطريقه اطباق المعايره الدقيقه وتم قياس قيم الكثافه الضوئيه باستخدام قارىء منظومة الاليزا, اظهرت النتائج ان طريقه اطباق المعايره الدقيقه اكثر كفاءه وحساسيه من طريقه احمر الكونغو للكشف عن الغشاء الحيوي اذ اظهرت نتائجها ان 4 عزلات فقط غير منتجه للغشاء الحيوي اما العزلات الاخرى فقد كانت منتجه بدرجات متفاوته . اظهرت نتائج التحري عن جينات تحسس الزحام باستخدام تقنيه تفاعل البلمره التسلسلي المتعدد وباستخدام بادئات خاصه بتسلسلات معينه لجينات الكوارم اظهرت النتائج ان 81,6% من هذه العزلات تمتلك واحد او اكثر من هذه الجينات بينما كانت 18.4% من هذه العزلات لا تمتلك الجينات اعلاه . تقنيه تفاعل البلمره التسلسلي استخدمت في التحري عن خمس من جينات عوامل الضراوه العائده لبكتريا الزوائف الزنجاريه وهي ((exoU,proteaseIV,exoS,pilB,plcH, اظهرت النتائج وجود هذه الجينات بنسبة (0% , 21.6 % ,26.6 % , 46.6% ,53.3% ) تباعا وكانت هذه العزلات تمتلك exoU وبعظها exoS وعلى اساسها صنفت العزلات على انها اما سامه او ضاريه . بينت الدراسة ان هناك بعض الطفرات قد حدثت في تسلسل القواعد النتروجينية للعزلات قيد الدراسة وكانت من نوع طفرات الاستبدال والادخال, كذلك تبين من مطابقة تسلسل القواعد النتروجينية المترجم مع تسلسل الاحماض الامينية الاصلي للجين لم يكن للطفرات تاثير على ناتج الترجمة . | A total of (60) clinical isolates of gram negative bacteria primary identified as Pseudomonas aeruginosa were obtained from different teaching hospitals in Baghdad ; Ibn - El Balady , Baghdad teaching hospital , Burn hospital and Teaching laboratory in Medical city. During the period between July 2013 till December 2013. The source of these isolates were as follows : (22) isolates collected from burn infections ,(18) isolates from wound infections, (9) isolates from sputum taken from patients suffering from respiratory tract infection,(6) isolates from blood,(2) isolates from urinary tract infections(UTI), and the last (3) isolates from ear swab. The isolates were initially identified by culturing on MacConkey agar,Blood agar, Pseudomonas agar then diagnosed by performing some biochemical tests (catalase and oxidase) followed by Genotypic diagnoses by PCR Which was performed by housekeeping gene (rpsL gene). The results confirm that all the 60 isolates were P.aeruginosa. Sixty P.aeruginosa isolates were tested for 12 antibiotics by using agar diffusion method , the results showed high resistance against Tetracycline 100%, Ceftazidime100%,Cefoxitin100%,Ceftriaxone85%,Cefepime,83.3%,Amoxicillin/Clavulanic acid 81.6%, and Chloramphinicol 78.3% moderate resistance against ,Pipracillin 51.6% , and low resistance against Tobramycin 33.3% , Norfloxacin 31.6%,Azithromycin 31.6% and Ciprofloxacin 28.3%. The ability of the isolates to produce biofilm were tested using congo red plate method and Tissue culture plate method(TCP). Results showed that TCP method is a more quantitative and reliable method for the detection of biofilm this method show that 6.6% isolates were not biofilm producers while other isolates produce it in different degrees . Multiplex polymerase chain reaction (PCR) technique was performed using specific primers targeting the specific sequences of Quorum sensing genes (lasR,lasI , rhlR,rhlI) .The results showed that 81.6% positive for one or more QS genes while only 18.3% were negative for all these genes. Polymerase chain reaction (PCR) technique was used to screened five virulence factors (exoU,proteaseIV,exoS, PilB , PlcH) results showed percentage were (53.3% , 46.6% , 26,6 % , 21,6 % , 0% ,) positive isolates respectively and these isolates contain either exoU or exoS and according to this have been classified into cytotoxic and invasive. Determination of nucleotides sequence for QS genes was revealed there was some mutations occurred which included substitution and insertion. From the other side results of identities of translated - nucleotides sequence with original sequence of amino acids revealed that there were no effect of mutations on translation product.
