تحضير مصل تشخيصي متعدد التكافؤ لبكتيريا السالمونيلا للنمطين المصليين Typhi وTyphimurium == Preparation of Polyvalent Diagnostic Antisera for Salmonella serovares Typhi and Typhimurium
Author name:
امير صادق ياسر العذاري
Supervisor name:
حبيب صاحب نهر | علاء حسين حيدر
General topic:
Medicine
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
University of Babylon - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Babylon
First pages:
19T1666 - p.pdf
Abstract:
اجريت هذه الدراسة على عزلتين مختلفتين لبكتريا Salmonella ( typhi وtyphimurium ) تم الحصول عليهما من مختبر الصحة العامة في محافظة النجف خلال شهر كانون الاول 2014. تضمنت الدراسة ثلاثة محاور رئيسية , المحور الاول بكتريولوجي وتضمن دراسة تشخيصية للعزلتين وفق انظمة تشخيصية متقدمة ومعتمدة وتضمن المحور الثاني الكشف عن بعض عوامل الضراوة التي تمتلكها البكتريا كقدرتها على الحركة, وانتاج انزيم البروتييز والقدرة على تكوين biofilm اما المحور الثالث فقد تضمن دراسة مناعية تم من خلالها تحضير المستضد الجسمي والمصل التشخيصي متعدد التكافؤPolyvalent antisera لكل من العزلتين.تم اختبار البكتريا من خلال اجراء الفحوصات المجهرية والكيموحياتية وتقنيات Api - 20 والVitek2 ومن خلال نتائج تلك الفحوصات ومقارنتها بالصفات النوعية للبكتريا تاكد بانه العزلتين قيد الدراسة هما Salmonella typhi , وSalmonella typhimurium . اظهرت النتائج قدرة بكتريا Salmonella جنس typhimurium على استهلاك السترات , وانتاجها لكميات كبيرة لكبريتيد الهيدروجين على وسط kliglar iron agar في حين كانت لها القدرة على تخمير العديد من السكريات واهما سكر Arabinose . في حين كانت العزلة للجنس typhi غير قادرة على استهلاك السترات وانتاجها لكميات قليلة لكبريتيد الهيدروجين بالاضافة لعدم قدرتها على تخمير سكر Arabinose .كشفت الدراسة عن امتلاك بكتريا السالمونيلا لبعض عوامل الضراوة متمثلة بانتاج الانزيم المحلل للبروتينات protease enzyme وقدرتها على تكوين biofilm الذي تعتبر احدى العوامل الرئيسة في تلوث الاغذية المحفوظة وانتشار المرض اضافة الى قدرة البكتريا على الحركة بنشاط مما يمكنها من اختراق الطبقة المخاطية المبطنة للامعاء. ومن النتائج التي توصلت اليها الدراسة قدرة البكتريا على مقاومة المضادات الحيوية النيومايسن والكلورامفينكول الذي كان في السابق يعتبر المضاد الحيوي الاول في علاج الاصابة ببكتريا السالمونيلا في حين اظهرت البكتريا حساسية كبيرة للمضادين السيبروفلوكساسين والسيفترياكسون اضافة الى حساسيتها للمضادات كوتريميكسازول والتيتراسايكلين والنالدكسك اسد ,كما اظهرت العزلتين تباين في نسبة الحساسية الكبيرة الى المتوسطة للمضادين الاموكسلين والامبسيلين حيث كانت Salmonella typhi حساسة لتلك المضادات في حين كانت Salmonella typhimurium متوسطة الحساسية لتلك المضادات .المصل التشخيصي متعدد التكافؤPolyvalent diagnostic antisera تم تحضيره خلال طريقة مقترحة من قبل جامعه فلوريدا. حيث تم تحضير المستضدات الجسمية لكلتا العزلتين لبكتريا السالمونيلا المقتولة بالحرارة وحقن هذه المستضدات في الحيوانات المختبرية ( ارانب ) التي قسمت الى ثلاثة مجاميع حقنت الاولى والثانية منها بمستضدات جسمية مختلفة للعزلتين المختلفتين وباربعة جرع بين حقنة واخرى ثلاثة الى اربعة ايام في حين حقنت المجموعة الثالثة بالمحلول الملحي الفسلجي واستخدمت كمجموعة سيطرة للمقارنة تم بعد الحقنة الرابعة للحيوانات سحب الدم من الحيوانات بطريقة ثقب القلب تم عزل المصول واختبار كفاءتها في الكشف عن البكتريا من خلال فحص التلازن agglutination test لكلا المستضدين مع الاضداد المتمثلة بالمصل وكانت النتيجة موجبة لكلا الفحصين . اما عند مزج المستضد للعزلة الاولى مع الضد العزلة الثانية فقد اظهرت نتيجة موجبة للتلازن لكنها كانت ضعيفة مقارنة مع النتيجة الاولى, في حين عند عمل تفاعل مع بعض انواع من البكتيريا الواقعة ضمن العائلة المعوية فكانت النتيجة غير جديرة بالذكر | The present study was executed on two different isolates of Salmonella (typhi and typhimuruim) which were obtained from Central Health Laboratory in AL - Najaf province during December 2014. The study included three main parts. The first part was to confirm diagnosis of those isolates based on reliable diagnostic procedures. The second part concerned with the study of some virulence factors of Salmonella such as motility, production of protease enzyme and ability to formation of biofilm. The last part included immunological study including preparation of somatic antigen and polyvalent diagnostic antisera for each isolates. The suspected isolates were fully identified by using bacteriological, biochemical, API 20E and Vitek2 techniques. The results of these tests which compared with specific characteristics of Salmonella indicated, it was that the isolates included in this study were Salmonella typhi and Salmonella typhmurium . The results revealed that ability of Salmonella genus typhimurium was able to utilize citrate, produce high amount of H2S in Kliglar iron agar and ferment Arabinose sugar, while Salmonella typhi was incapable to citrate utilization and produce little amount of H2S in Kliglar iron agar and has inability to ferment Arabinose sugar. The results revealed that Salmonella produced virulence factors represented by producing protease enzyme and biofilm formation which consider as the main factor in contaminating of food and transmission of disease. The results exhibited a remarkable resistance of Salmonella to Neomycin and Chloramphenicol which was consider the first choice in treatment of Salmonella, but it was sensitive to Ciprofloxacin, Ceftriaxone, Cotrimoxazole, Tetracycline and Naldixic acid, while it exhibited variable sensitive to Ampicillin and Amoxicillin . Polyvalent diagnostic antisera were prepared according to protocol being suggested by Florida State University. Preparation of heat killed somatic antigen for each isolates of Salmonella, then were injected in three groups of laboratory animals (rabbits). The first and second group was injected with different somatic antigen in four successive doses with an interval time of three to four days, while the third group was injected with normal saline which used as control. Blood was collected from animals by intracardiac injection then serum has been separated and tested for its specificity by reaction with Salmonella typhi and Salmonella typhimurium using the agglutination test. The results were highly positive and specific, but when test antigen of first isolate with serum of second isolate will exhibit positive result with weak agglutination, then when cross reaction prepared antisera with live antigens of other some species belong Enterobactrecea the results was no considerable reaction
