دراسات وراثية خلوية ومناعية لمرضى التهاب القولون التقرحي == Cytogenetical and Immunological Studies of Ulcerative Colitis
Author name:
زينب محمد طاهر جعفر الملا حسن
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Immunology
Degree:
Doctorate
University:
University of Baghdad
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3068 - p.pdf
Abstract:
تضمنت الدراسة الحصول على عينات الدم المحيطي والخزع النسيجية الماخوذة من المرضى المصابين بالتهاب القولون التقرحي المزمن والمرضى المصابين بسرطان القولون، ومن الجنسين كليهما، ومن مختلف الاعمار. تم سحب حوالي 10 مل من دم المرضى وقسمت العينة على ثلاثة اقسام، القسم الاول استعمل لاجراء الدراسات الوراثية الخلوية. والقسم الثاني لاجراء دراسات البيولوجيا الجزيئية. والقسم الثالث لاجراء الدراسات المناعية. اجريت الدراسات الوراثية الخلوية من اجل التعرف على التغييرات التي قد تطرا على المقاييس الوراثية الخلوية المتمثلة بقياس معامل الارومةBlastogenic index ، ومعامل الانقسام Mitotic index، ومعامل التضاعفReplicative index ، واختبار التبادل الكروماتيدي الشقيقي Sister chromatid exchange، واختبار تردد الطفرة Mutation Frequency. وقد تم ذلك من زرع خلايا الدم المحيطي في الوسط الزرعي الحاوي على المادة المعلمة (Brdu - 5) والمادة المشطرةA) PH). اوضحت النتائج وجود انخفاض في المقاييس الوراثية الخلوية المتمثلة بمعامل الارومة، ومعامل الانقسام، ومعامل التضاعف. بينما لوحظ ارتفاع في المعدلات التلقائية في التبادل الكروماتيدي الشقيقي لمرضى التهاب القولون التقرحي وسرطان القولون قياسا بالاصحاء. كما ولوحظ هذا الارتفاع في معدلات التبادل الكروماتيدي الشقيقي عند المعاملة بالعقار الميثوتركسيت، اذ لوحظ وجود خلايا نامية في تراكيز واطئة من عقار الميثوتركسيت.اما عن ا لجانب البايولوجي الجزيئي فقد تم قياس تراكيز الحوامض النووية المتمثلة بما يلي : الحامض النووي الرايبوزي (RNA) والحامض النووي المزدوج الشريط ) (dsDNAوالحامض النووي الاحادي الشريط (ssDNA) وذلك بتنميتها في الوسط الزرعي في اوقات حضانة مختلفة (الزمن صفر، ثم بعد24 ساعة ، ثم بعد48 ساعة ، ثم بعد 72 ساعة من الحضانة ). اوضحت النتائج وجود اضطراب في نمو الخلايا الماخوذة من مرضى التهاب القولون التقرحي عند القياس بالاصحاء . كذلك تم قياس تراكيز الحوامض النووية المذكورة اعلاه في الخلايا المنماة في تراكيز عالية من عقار الميثوتركسيت والمتمثلة بتركيز 1 مايكروغم / مليلتر و2 مايكروغم / مليلتر لكل من المرضى والاصحاء بعد تنميتها لمدة حضانة 72 ساعة. اذ لوحظ عدم وجود فروقات معنوية لهذين التركيزين بين الاصحاء والمرضى. اما فيما يتعلق بنتائج التهجين في الموقع in situ hybridiza¬tion لغرض الكشف عن التعبير الجيني للجين الكابح للورم P53 والجين المثبط للموت المبرمج Bcl - 2 ، اذ تم اخذ الخزع النسيجية من المرضى المصابين بالتهاب القولون التقرحي المزمن وسرطان القولون وقياسها بالاصحاء. اوضحت النتائج وجود علاقة بين المورثين في مرضى التهاب القولون التقرحي وسرطان القولون عند قياسهما بالاصحاء، اذ اعطى الجين الكابح للورم نسبة 66 % في الانسجة المصابة بالتهاب القولون التقرحي قياسا بسرطان القولون وهذا يوضح حصول طفرات تراكمية في الجين الكابح للورم P53 والذي يعطي مؤشر على التقدم نحو التسرطن ، وكذلك الحال مع الجين Bcl - 2 الذي اوضح زيادة بالتعبير الجيني لهذا الجين في النماذج النسيجية لمرضى التهاب القولون التقرحي قياسا بسرطان القولون والاصحاء. ان التحري عن جين P53 يعطي مؤشرا عن الطفرات التراكمية او الشذوذ في فعالياته ويمكن الاستفادة منه في اعتباره قيمة تشخيصية وانذارية. اما بالنسبة للجانب المناعي فقد استخدمت فحوص مناعية عدة متمثلة بقياس الكلوبيولينات المناعية (IgG , IgA , IgM)، والعامل المتمم (C3 & C4) وفحص الاضداد الذاتية لسايتوبلازم الخلايا العدلة (ANCA) Anti neutrophile cytoplasmic antibodies والذي يشمل c - ANCA والذي اعطى حوالي 50% نتيجة موجبة من مجموع العينات، وفحص p - ANCA والذي اعطى حوالي 50% نتيجة موجبة، وفحص الاجسام المضادة الذاتية للمتقدرات (AMA) الذي اعطى حوالي 48% نتيجة موجبة وفحص الاضداد المناعية الذاتية للشريط المزدوج للحامض النووي منقوص الاوكسجين dsDNA)) الذي اعطى 43% نتيجة موجبة، وفحص اضداد شحم القلب (Anticardiolipin ) الذي اعطى 40% نتيجة موجبة من مجموع العينات.اوضحت نتائج الفحوصات المناعية ارتفاع نسب الكلوبيولينات المناعية والعامل المتمم في مصل مرضى التهاب القولون التقرحي وسرطان القولون قياسا بالاصحاء وعلى مستوى احتمالية (P ≤ 0.01). ان نتائج الفحوصات المناعية المستعملة في هذه الدراسة تفسر وجود اضداد ذاتية في مصل مجاميع المرضى المصابين تحت الدراسة. وهذا يوضح كون المرض يمكن ان يعزى في جانب منها الى اسباب مناعية ذاتية. | The investigation has been done on the peripheral blood and biopsy samples which drawn from patients suffered from ulcerative colitis & colon cancer , the samples were taken from female and male of different ages . The collected blood samples were about 10 ml &each sample was divided into 3 parts , the first part used for cytogenetic studies,the second part used for molecular studies & the last part used for immunological studies . The cytogenetic studies has been done in order to define the damaging effect of the disease and the effect of the drug (methotrexate ) on the peripheral blood lymphocytes . these damages were manifested through the significant reduction in the blastogenic index (BI ) , mitotic index ( MI ) , & replication index ( RI ) . This accompanied by significant increase in the sister chromatid exchange ( SCEs ) . In addition to investigate the mutation fraction in the cells cultured in selective medium containing different concentration of the drug . The results also showed presence of mutant cells that can grow in increasing concentrations of methotrexate . The molecular studies include measuring the concentrations of different types of nucleic acids ( dsDNA , ssDNA , RNA ) done by culturing the peripheral blood cells in different incubation times which include T 0 , T1 ( 24 hrs ) , T2 (48hrs ) , T3 (48 hrs ) & T4 (72 hrs ) . The results indicate disturbance in cell cycle comparing with healthy individuals . There was no significant differences in types of nucleic acids between patients & controls , when culturing the resistant cells of blood lymphocytes in high concentrations of the MTX drug ( 1 μg/ ml , 2 μg / ml ) . On the levels of in situ hybridization , the colonic biopsies which collected from patients of ulcerative colitis and colon cancer were examined for gene expression of P53 gene and Bcl - 2 gene . The results indicated accumulated mutations in P53 gene in the inflammed colonic biopsies , this result give an indication for progression of carcinogenesis .While on the level on Bcl - 2 , the results showed increasing in the activity of the gene , resulting in increase in gene expression of Bcl - 2 gene . The gene expression of Bcl - 2 in inflamed colonic tissues were approximately similar to gene expression in tissues of colon cancer . this indicate that the chronic inflammation of UC may ultimately infected with colon cancer . The detection of P53 gene and Bcl - 2 gene in chronic ulcerative colitis give early detection for diagnostic & therapeutic and monitering purposes . The immunological studies conducted to insight into immunological disturbance associated with clinical expression of ulcerative colitis of Iraqi patients and to provide a locally made easy diagnostic tests that can be used in routine work and to study the recent serological markers , that may help in the diagnosis of IBD . The immunological profiles of the patients of UC were studied using different parameters . To assess the importance of antineutrophile cytoplasmic antibodies ( ANCA ) were found in enzyme linked immunoassay ( ELISA ) , for anti - myeloperoxidase (anti - MPO ) antibodies as (P - ANCA) and anti - propteinase - 3 (anti - PR - 3 ) antibodies for ( C - ANCA ) . The C - ANCA test give 50 % positive results , while the P - ANCA test give 55% positive results . The anti - mitochondrial M - 2 antibody was estimated in sera of UC patients and gives 48% positive results . The other serological marker used was the double strand DNA antibody and give 43 % positive results . Also the anticardiolipin antibody was examined and the test give 40 % positive results and this result indicate presence IgM / IgG concentrations in the sera of patients . The levels of immunoglobulins that include ( IgG , IgM , IgA ) as well as some of complement components ( C3 , C4 ) were used in estimation in the sera of the studied groups . The results showed an increase in the levels of immunoglobulins and the complement concentrations at levels of P ≤ 0.01 . The results of immunological markers in this study explained presence of auto antibodies and emphasized by increasing levels of immunoglobulins in the sera of the patients
