العزل والتشخيص الجزيئي للفطريات المعزولة من التربة المنتجة للمواد الايضية المضادة للميكروبات == Isolation and Molecular Identification of Antimicrobial Metabolites Producing Fungal Isolated from Soil
Author name:
سرى رحمن نوار المسافر
Supervisor name:
نداء شهاب حمد
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Fungi
Degree:
Master
University:
University of Babylon - College Of Science For Girls - Department Of Biology
Language:
English
University location:
Babylon
First pages:
24T3048 - p.pdf
Abstract:
اجريت هذه الدراسة في مختبرات كلية العلوم للبنات / جامعة بابل للتحري عن الفطريات المنتجة للمركبات الضد ميكروبية في تربة محافظه بابل للمدة من ايلول ,2015 الى ايلول ,2016 . حيث جمعت عينات التربة من مناطق مختلف وشملت الترب الزراعية والترب الغير مزروعة كذلك الترب الملحية وترب الشاطئ والترب الصناعية ,تم تنقية 200 عزله فطرية عشوائيا واختبرت قدرتها التضادية مع عدد من الاحياء المجهرية الممرضة لتحديد قدرتها الانتاجيه .تم اختبار 200 عزلة فطرية بواسطة المسح الاولي لتحديد قابليتها على تثبيط البكتريا الممرضة السالبة والموجبة والفطريات المرضية خارج الوسط الحي .بينت نتائج التضاد ان 72 عزلة كانت قادره على تثبيط 3≤ من الكائنات الممرضة وقد اختبرت هذه العزلات لتحديد انتاجيتها للحوامض حيث وجد ان 13 فقط كانت غير منتجه و59 عزله منتجه بنسب مختلفة .استثنيت العزلات المنتجة للحوامض من الدراسة لان نسبه الحامض ادت الى قتل الاحياء المجهرية الممرضة . اما العزلات غير المنتجة فقد اختيرت منها العزلات الاكثر فعالية في التثبيط وذات مدى تثبيطي واسع . تم تشخيص العينات الفطرية مظهريا باستخدام المجهر الالكتروني واوساط زرعيه تشخيصية مختلفة ,اما التشخيص الجزيئي للعزلات فقد تم باستخدام البادئ العامITS1و ITS4 لتضخيم منطقة Internal transcribed spacer ,حيث بينت نتائج التشخيص المظهري والجزيئي للعزلات بانها تعود للجنسين Aspergillus fumigates وTrichoderma longibrachiatum. اما نتائج فحص الحساسية فقد اوضحت ان العزلتين 104وS4 هما الاقوى في الانتاج على وسط مخلفات البطاطا الصلب بالمقارنه مع الاوساط السائلة وتحت ضروف مثلى من درجة حراره واس هايدروجيني وزمن انتاج .بينت النتائج بان المركبات المعزوله كانت ذات تاثير واسع الطيف ضد مجموعة من البكتريا الموجبه والسالبة لصبغة كرام لذالك تم اختبار فعاليتها ضد مجموعة من الخمائر والاعفان الممرضه للانسان والمعزوله من مختبرات مستشفيات محافظة بابل.عند مقارنه النتائج التي تم الحصول عليها مع نتائج المضادات الصيدلانية وجد ان تاثير المضاد المنتج يفوق تاثير كل من Tetracycline, Amikacin, Ampicillin, Gentamycin, بصورة كبيرة بالاضافة الى تاثيرها على مجموعة من الاعفان الممرضة. اما اعلى قطر تثبيط تم الحصول علية يعود للعزلة S4 ضد البكتريا Bacillus seraus بقطر 43.35mm بعد تنمية الفطر على وسط مخلفات البطاطا الصلب لمدة 9 ايام بدرجه حراره 30 ◦م. وهو اعلى من قطر تثبيط المضاد Meropenem ضد البكتريا المذكوره.تضمنت الدراسة جوانب اخرى وهي استخلاص المركبات الفعالة من وسط التخمر باستخدام خلات الاثيل والماء المقطر ثم تنقيه المركب باستخدام تقنية كروماتوكرافيا الطبقة الرقيقة .كذلك تم تشخيص المركبات الفعالة باستخدام التحاليل الكيميائيه التالية(FTIR,HNMR and CHNS ) لمعرفة المجاميع الفعالة والتركيب الكيميائي للمركبات المستخلصة. | This study is conducted in the laboratories of Science College for Women’s / University of Babylon to investigate the antimicrobial producing fungi in the soil of Babylon province from September 2015 until September 2016 . Soil samples are collected from different regions included agricultural, non - agricultural, salty, sandy and carbonate soil, purified 200 fungal isolates randomly and tested the antagonism with a number of pathogenic microorganisms . The 200 fungal isolates are tested by primary screening method to determine their ability to inhibit in vitro Pathogenic gram positive and negative bacteria and pathogenic fungi. The primary screening illustrate that 72 isolate were able to inhibition 3≤ pathogenic organisms. These isolates were tested to determine the acid productivity which found that only 13 were non - acid production and 59 isolate are product in different concentration. The acids producing isolates are excluded from the study because the rate of acid led to killing of test pathogenic microorganism .The selected isolates are non - acid productive and most effective in the inhibition of test pathogenic microorganism with a wide range. The samples are morphologically identified using the electron microscope and different diagnostic agricultural media (PDA, CYA, MEA), either molecular diagnosis of isolates have been using ITS1 and, ITS4 primer to amplify the Internal transcribed spacer region, the morphological and molecular identification results of the isolates showed that it belongs to Aspergillus fumigatus and Trichoderma longibrachiatum. The sensitivity results illustrate that the isolates 104 and S4 are the strongest in the production on potatoes peals solid media in compared with liquid residues media under the optimal production condition including temperature, hydrogen power and time of production. Results show that the isolated antimicrobial compounds were broad - spectrum against both G+ve and G - ve bacteria so it has been tested its effectiveness against a group of pathogenic yeasts and molds isolated from laboratories of Babylon hospitals.When comparing the results obtained with the results of pharmaceutical antibiotics found that the effect of the product exceeds the effect of Tetracycline, Amikacin, Ampicillin, Gentamycin, in addition to significantly impact on a range of pathogenic molds. The highest inhibition zone is obtained due to the isolation of S4 against the bacteria Bacillus seraus with diameter 43.35mm after the incubation the isolates on the potato peals solid media for 9 days at a temperature of 30 ◦C. These diameter is higher than the inhibition zone of Meropenem antibiotics against the same bacteria.Other aspects of this study include an extracted of the active compounds from the fermentation media using ethyl acetate and distilled water and then purifying the compound using thin layer chromatography(TLC) technique. Also it has been diagnosed the active compounds using the following chemical analysis (FTIR, HNMR and CHNS) to illustrated the type of effective compound.
