دراسة فسلجية وجزيئية للتغاير الجيني لمستقبلات فيتامين د في النساء المصابات بمرض السكري من النوع الثاني == Physiological and Molecular Study of Vitamin D Receptor Gene Polymorphism in Type II Diabetic Women
Author name:
نورا ماجد حميد ابو خمرة
Supervisor name:
حيدر كامل زيدان السعدي | محمد عبد الله جبر
General topic:
Biology
Specific topic:
Biotechnologies
Degree:
Doctorate
University:
University of Babylon - College Of Science - Department Of Biology
Language:
Arabic
University location:
Babylon
First pages:
24T3510 - p.pdf
Abstract:
هدفت هذه الدراسة الى تقييم دور تعدد اشكال مستقبلات فيتامين (د) وارتباطها بتطور مرض السكري وتاثيرها في الاناث قبل وبعد سن الياس. جينات مستقبلات فيتامين (د)، تتضمن (Apa - I, Taq - I, Fok - I وCdx2) و(جين الفاEstrogen receptor - ) التي حددت بواسطة تفاعل سلسلة البوليميريز - تباين اطوال قطع التقييد وتقنية تفاعل سلسلة البوليميريز المتعدد المتخصص في الاليل, في حين ان الهرمونات والتي تتضمن (الاستراديول والانسولين) والمؤشرات الفسيولوجية (فيتامين د، الكولسترول، البروتين الدهني عالي الكثافة، الدهون الثلاثية، البروتين الدهني منخفض الكثافة، البروتين الدهني منخفض الكثافة جدا، الهيموجلوبين A1C، الجلوكوز الصيامي في الدم، مقاومة الانسولين، الحساسية للانسولين ، ضغط الدم الانقباضي وضغط الدم الانبساطي). اجريت هذه الدراسة في الفترة من اذار 2016 الى تشرين الاول 2016، حيث تم جمع العينات من مستشفى الصدر التعليمي في محافظة النجف. وقد بلغ عدد العينات (80) مريضا مصابين بداء السكري من النوع الثاني بمتوسط عمر (36 - 65 سنة ، وقسمت العينات الى مرحلة ما قبل انقطاع الطمث وبعد انقطاع الطمث, كذلك قسمت حسب مدة المرض وحسب التاريخ العائلي، ومؤشر كتلة الجسم، ومضاعفات المرض (ضغط الدم المرتفع). كما تضمنت الدراسة 40 شخصا اصحاء على ما يبدو بمتوسط عمر (36 - 65 سنة)، حيث ان مجموعة السيطرة تقارن مع مجموعة المرضى. قسمت الدراسة الحالية الى جزئين رئيسيين : الاجزاء الفسيولوجية والجزيئية. واظهرت النتائج ان المرضى الذين يعانون من مرض السكري من النوع الثاني، كان لديهم معنويا (p ≤ 0.05) مستوى اعلى من الكوليسترول ، الدهون الثلاثية، البروتين الدهني منخفض الكثافة، البروتين الدهني منخفض الكثافة جدا، الهيموغلوبين A1C، الانسولين، مقاومة الانسولين ونسبة السكر الصيامي في الدم مقارنة بمجموعة السيطرة، في حين ان معدلات الحساسية للانسولين تنخفض معنويا (P≥0.05) في مرضى السكري من النوع الثاني عند مقارنتهم بمجموعة السيطرة. كان معدل الاستراديول معنويا ( ≤ 0.05) اعلى في الاناث قبل انقطاع الطمث في حين انخفض في الاناث بعد سن الياس لكل من مجموعة السيطرة ومرضى السكري من النوع الثاني. واظهر الضغط الانقباضي والانبساطي فرقا معنويا بين المرضى الذين يعانون من السكري النوع 2 ومجموعة السيطرة. وفقا للمقارنة بين النساء قبل انقطاع الطمث وبعد سن الياس في كل من مرضى السكري ومجموعة السيطرة، اظهرت النتائج ارتفاع معنوي (p ≤ 0.05) في معدلات مستوى هرمون الاستراديول، ومعدلات مستوى هرمون الانسولين ومقاومة الانسولين في كلتا المجموعتين. من ناحية اخرى، اظهرت المقارنة بين المرضى قبل انقطاع الطمث الذين يعانون من السكري ومرحلة ما قبل انقطاع الطمث ارتفاع معنوي (p ≤ 0.05) في معدل مستويات الكوليسترول، البروتين الدهني منخفض الكثافة، هيموغلوبين A1c معدل مستويات (HBA1c)، الجلوكوز الصيامي في الدم , ومستويات هرمون الاستراديول، ومعدلات مستوى هرمون الانسولين، ومقاومة الانسولين، وحساسية الانسولين وضغط الدم الانبساطي. وفقا لمقارنة مرضى السكري بعد انقطاع الطمث ومجموعة السيطرة بعد سن الياس، كانت هناك اختلافات معنوية (p ≤ 0.05) في معدل مستويات الكوليسترول، البروتين الدهني منخفض الكثافة، معدل هيموغلوبين A1c، الجلوكوز الصيامي في الدم , هرمون الاستراديول ومعدلات مستوى هرمون الانسولين، ومقاومة الانسولين وحساسيةالانسولين. اظهرت نتائج تحليل الارتباط وجود ارتباط معنوي (p ≤ 0.05) بين فيتامين (د) مع الدهون الثلاثية والبروتين الدهني منخفض الكثافة جدا في النوع الثاني من مرضى السكري. في مرضى السكري قبل انقطاع الطمث، اظهرت نتائج تحليل الارتباط وجود علاقة عكسية معنويه بين فيتامين (د) مع كل من الدهون الثلاثية والبروتين الدهني منخفض الكثافة جدا في حين تم العثور على علاقة ايجابية معنوية بين فيتامين (د) والبروتين الدهني عالي الكثافة في مرحلة ما بعد انقطاع الطمث في مرضى السكري. في مجموعة السيطرة بعد انقطاع الطمث تم العثور على علاقة عكسية معنويه بين فيتامين (د) ومستوى السكر الصيامي في الدم. اظهر تحليل الارتباط وجود علاقة معنوية عكسية بين معدلات مستوى الكالسيوم وضغط الدم الانقباضي في مجموعة السيطرة، وبينما في مرضى السكري قبل انقطاع الطمث، اظهرت نتائج تحليل الارتباط وجود علاقة ارتباط معنوية بين الكالسيوم ومؤشر كتلة الجسم، بينما وجدت علاقة معنوية عكسية بين الكالسيوم وكلا من البروتين الدهني عالي الكثافة والعمر بالاضافة الى ارتباط ايجابي معنوي مع الاستراديول في المرضى بعد سن الياس. من ناحية اخرى، في مجموعة السيطرة قبل انقطاع الطمث، تم العثور على ارتباط عكسي معنوي بين الكالسيوم وضغط الدم الانقباضي، في حين وجود علاقة طردية معنوية مع هرمون الانسولين ومقاومة الانسولين. في حين لوحظ وجود علاقة عكسية معنوية في مجموعة السيطرة بعد سن الياس بين الكالسيوم ومستوى السكر الصيامي في الدم ومؤشر كتلة الجسم. هنالك ارتباط معنوي كبير بين هرمون الانسولين مع البروتين الدهني عالي الكثافة والعمر وحساسية الانسولين، في حين كان هناك علاقة طردية معنوية بين الانسولين مع مؤشر كتلة الجسم ومقاومة الانسولين في النوع الثاني من مرضى السكري. في مجموعة السيطرة كانت هناك علاقة ارتباط معنوية طردية بين الانسولين ومقاومة الانسولين، ارتباط معنوي عكسية مع حساسية الانسولين. في كل من مرضى السكري قبل انقطاع الطمث وبعد انقطاع الطمث ومجموعة السيطرة كانت هناك علاقة سلبية كبيرة جدا بين الانسولين وحساسية الانسولين، في حين وجود علاقة طردية معنوية مع مقاومة الانسولين. في مرضى السكري قبل انقطاع الطمث، كانت هناك علاقة ايجابية كبيرة بين الانسولين والدهون الثلاثية , البروتين الدهني منخفض الكثافة جدا ومؤشر كتلة الجسم. في مرحلة ما بعد انقطاع الطمث مرضى السكري، كانت هناك علاقة سلبية كبيرة بين الانسولين والهيموغلوبين .A1c ايضا هنالك علاقة طردية معنوية كبيرة بين الهيموغلوبين A1c والسكر الصيامي في الدم في مجموعة السكري. في مجموعة السيطرة كان هناك ارتباط طردي كبير بين الهيموغلوبين A1c والسكر الصيامي في الدم ,وعلاقة عكسية معنوية مع الكولسترول وحساسية الانسولين. وفقا لمجموعة السيطرة قبل انقطاع الطمث، كان هناك ارتباط ايجابي كبير بين الهيموغلوبين A1c والجلوكوز الصيامي في الدم، في حين وجود علاقة عكسية كبيرة مع الكولسترول، الدهون الثلاثية، البروتين الدهني منخفض الكثافة جدا وحساسية الانسولين. من ناحية اخرى، في مجموعات مرضى السكري قبل انقطاع الطمث وبعد انقطاع الطمث وجدت علاقة طردية معنوية بين الهيموغلوبين A1c والسكر الصيامي في الدم , وارتباط ايجابي كبير مع الدهون الثلاثية والبروتين الدهني منخفض الكثافة جدا في مجموعة ما قبل انقطاع الطمث فقط. اظهرت نتائج التحليل الوراثي لتباين النوكليوتيدات المفردة، للجينات المستقبلة لفيتامين د باستخدام تقنية تفاعل سلسلة البوليميريز - تباين اطوال قطع التقييد ان هناك فرقا غير معنوي في الاشكال الجينية (Apa - I, Fok - I, Taq I - ) و(Estrogen receptor - alpha ) بين المرضى ومجموعة السيطرة باستخدام نفس التقنية اعلاه. بينما وجد فرق معنوي بين المرضى ومجموعة السيطرة وفقا للتغاير الجيني في الجين (CdxII)وفقا الى الجين (Apa - I)، كان النمط الوراثي المتماثل (AA) اكثر تواترا في المرضى الذين يعانون من داء السكري من النوع 2 (41٪) من مجموعة السيطرة ، في حين ان النمط الوراثي المتغاير (CA) اكثر تكرارا في مجموعة السيطرة من المرضى. نتائج الجين (Taq - I)، كان النمط الوراثي المتماثل (TT) اكثر تواترا في مجموعة السيطرة من المرضى الذين يعانون من السكري من النوع 2 ، في حين ان النمط الوراثي المتغاير (TC) كان اكثر تكرارا في المرضى من مجموعة السيطرة. وفقا الى الجين (Fok - I)، كان النمط المتماثل (CC) اكثر تواترا في مجموعة السيطرة من المرضى الذين يعانون من داء السكري من النوع 2 ، في حين ان النمط المتغاير (CT) اكثر تكرارا في السيطرة من المرضى ، والنمط المتماثل (TT) كان اكثر تواترا في المرضى من مجموعة السيطرة بينما الجين (ER_alpha)، كان النمط المتماثل (AA) اكثر تواترا في المرضى الذين يعانون من داء السكري من النوع 2 من مجموعة السيطرة ، في حين ان النمط المتغاير (AG) اكثر تواترا في السيطرة من المرضى ، والنمط المتماثل (GG) كان اكثر تكرارا في المرضى من مجموعة السيطرة | This study aimed to evaluate vitamin D receptor gene polymorphism role and its correlation with the development of diabetes disease and its effect in pre and post menopausal females. Vitamin D receptor gene including ( APA - I, FOk - I, Taq - I and CdxII) and (Estrogen receptor alpha gene) determined by Polymerase Chain Reaction (PCR) , restriction fragment length polymorphism (PCR - RFLP) and Allele specific multiple (ASM - PCR), while the hormones including (Estradiol and Insulin) and the physiological parameters ( Vitamin D, Cholesterol, High density lipoprotein, Triglyceride, Low density lipoprotein, very low density lipoprotein, Hemoglobin A1c, Fasting Blood Glucose, insulin resistance, insulin sensitivity, systolic and diastolic blood pressure). This case - control study was done in a period of March 2016 to October 2016 ,where the samples collected from Al - Sadr Teaching Hospital in Najaf Province. The number of samples was (80) females with type 2 diabetes with an average age (36 - 65 year), all of them were with type 2 diabetes are divided to pre menopause and post menopause, also divided according to duration of disease and according to age groups, family history, body mass index and complications with disease (hypertensive blood pressure). Also, the study included 40 apparently healthy people with an average age ( 36 - 65 year) , as control matched with disease group. The present study divided into two main parts : physiological and molecular parts . The results showed that patients with type 2 diabetes , had significantly( p ≤ 0.05 ) higher cholesterol, Triglyceride, Low density lipoprotein, very low density lipoprotein, Hemoglobin A1c, insulin, insulin resistance and Fasting blood glucose levels rate than control group, while the levels rate of insulin sensitivity is decreased significantly (p ≤ 0.05) in type 2 diabetic patients when compared with control group . The Estradiol levels rate was significantly (p ≤ 0.05) higher in premenopausal females while it decreased in postmenopausal females of both control and type 2 diabetic patients. Systolic and diastolic pressure showed significant difference between patients with type 2 diabetic and control. According to the comparison of premenopausal and postmenopausal women in both diabetic patients and in control group, the results showed significant ( p ≤ 0.05) elevation in Estradiol hormone level rates, Insulin hormone level rates and insulin resistance in both groups. On the other , the comparison of premenopausal patients with diabetic and premenopausal control groups the statistical analysis showed significant elevation (p ≤ 0.05) in cholesterol levels rate, Low density lipoprotein (LDL), HemoglobinA1c levels rate (HBA1c), fasting blood glucose (FBG), Estradiol hormone level rates, Insulin hormone level rates, insulin resistance ,insulin sensitivity and diastolic blood pressure. The results of correlation analysis in pre menopausal diabetic patients showed there are significant negative correlation between vitamin D with both Triglyceride (TGC) and very low density lipoprotein (VLDL) while significant positive correlation has been found between vitamin D and high density lipoprotein (HDL) in post menopausal diabetic patients. In post menopausal control group a significant negative correlation has been found between vitamin D and fasting blood glucose (FBG) level.In pre menopausal diabetic patients, the results of correlation analysis showed there were significant positive correlation between calcium and BMI, while significant negative correlation has been found between calcium and both high density lipoprotein (HDL) and age in addition to significant positive correlation with Estradiol in post menopausal diabetic patients.On the other hand, In pre menopausal control group, a significant negative correlation has been found between calcium and systolic blood pressure, while a significant positive correlation with insulin hormone and insulin resistance. While, in post menopausal control group a significant negative correlation has been found between calcium and fasting blood glucose (FBG) level and body mass index. In both premenopausal and postmenopausal diabetic patients and control group there were highly significant negative correlation between Insulin and insulin sensitivity, while highly significant positive correlation with insulin resistance. In pre menopausal diabetic patients, there were significant positive correlation between insulin and Triglyceride (TGC), very low density lipoprotein (VLDL) and BMI. In post menopausal diabetic patients, there were significant negative correlation between insulin and HBA1c.On the other hand, in premenopausal and postmenopausal diabetic patients groups there were highly significant positive correlation between hemoglobinA1c (HBA1c) and fasting blood glucose (FBG), and significant positive correlation with TGC and VLDL in premenopausal group only. The genetic analysis of the Single Nucleotide Polymorphisms , for vitamin D receptor gene by using RFLP - PCR technique showed that there non - significant difference in the genotype polymorphisms of (APA - I, FOk - I and Taq - I) and (Estrogen receptor - alpha gene) between patients and control by using the same technique above, While there were significant differences according to (Cdx - II gene) by using (ASM - PCR) technique. According to (Apa - I gene), the homozygote pattern (AA) were more frequent in patients with type 2 diabetes than control group, While the heterozygote (CA) pattern more frequent in control than patients.The results of (Taq - I gene), the homozygote pattern (TT) were more frequent in control than patients with type 2 diabetes group, While the heterozygote (TC) pattern more frequent in patients than control. According to (Fok - I gene), the homozygote pattern (CC) were more frequent in control group than patients with type 2 diabetes, While the heterozygote (CT) pattern more frequent in control than patients, and the homozygote (TT) pattern was more frequent in patients than control group.While the (ER_alpha gene), the homozygote pattern (AA) were more frequent in patients with type 2 diabetes than control group, While the heterozygote (AG) pattern more frequent in control than patients, and the homozygote (GG) pattern was more frequent in patients than control group
