الكشف عن جينات السموم الفائقة في المكورات العنقودية الذهبية المعزولة من حالات التسمم الغذائي المحلية == Detection of Superantigenic Toxin Genes in Staphylococcus aureus Isolated from Local Cases of Food Poisoning
Author name:
بارق عبد اللطيف صبر العجيلي
Supervisor name:
ميساء صالح مهدي الشكري | حسن سالم الجميلي
General topic:
Medicine
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
University of Babylon - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Babylon
First pages:
19T1704 - p.pdf
Abstract:
جمعت في هذه الدراسة 100عينة من عينات الخروج لمرضى راجعوا مستشفى الحلة التعليمي ومدينه مرجان الطبية خلال الفترة من تموز 2016 الى ايلول 2016م. ثم زرعت العينات التي تم الحصول عليها على اوساط انتقائية واجريت عليها اختبارات بايوكيميائية وبكتريولوجية من اجل التشخيص. من مجموع (100) عينة تم الحصول على20 (20%) عزلة مكورات عنقودية الذهبيه , وشخص تكوين الاغشية الحيوية بواسطة طريقتين : طريقة الانبوب (TM) وطريقة الطبق الزرعي النسيجي (TCP) فكانت النتائج كالاتي : وجد ان في طريقة الانبوب كانت جميع عزلات المكورات العنقودية الذهبية منتجة للاغشية الحيوية بينما في طريقة الطبق الزرعي النسيجي وجد ان (15%)من العزلات منتجة للاغشية الحيوية من النوع القوي و(50%) من نوع الغشيه الحيوية المتوسط وكذلك (35%)اظهر تضعيفه او غير مكونه للاغشيه الحيوية حسب قيم الامتصاصية عند كثافته نوعيه OD at 570nm .تم دراسة بعض عوامل الضراوه لجميع عزلات المكورات العنقودية الذهبية مثل قابلية التحلل على وسط الدم والنتائج بينت كل عزلات المكورات (20) (100%) لها قابلية لانتاج تحلل كامل (بيتا) وكذلك تم اختبار انتاج انزيم الفوسفولايبيز سي النتيجه بينت (70%)من عزلات المكورات العنقودية الذهبيه كانت منتجه للانزيم و(30%)من العزلات كانت غير منتجة لانزيم الفوسفولايبيز سي. تم التحري عن حساسية العزلات للمضادات الحياتية باستخدام طريقة انشار القرص. وقد وجد ان هذه العزلات كانت مقاومة لاكثر من نوع من المضادات الحيوية.فقد بينت النتائج ان (85%) من عزلات المكورات العنقودية الذهبية مقاومه للسفترياكسون وبينت نسبه مقاومه (75%)للاميبينيم بينما العزلات كانت مقاومه للتيترا سايكلين والاريثرومايسيين كانت (65%) كذلك مقاومه لكل من اوكساسيليين والاميكاسيين عند (25%)و(35%)على التوالي بينما بينت مقاومه لكل من جينتا ماسيين والكلورومفنيكول عند (15%) لكل منها تفاعل البلمرة المتسلسل قد استخدم للكشف عن جينات الضراوه التي تشفر للسموم المعوية وسموم الاصابات االجلديه وسموم متلازمه الصدمه وكذلك انزيم المخثر لعزلات المكورات العنقوديه الذهبيه التي بينت نتائج موجيه لكل من جينات sea,seb, agr, seg,sei,she,tst,eta,etb,coa,بنسبه وعدد كانت 8 (40%) ,7(35%) و19(95%),13(65%),20 (100%) ,1(5%) و(100%),9(45%),14(70%), 20(100%) على الترتيب.تفاعل البلمره المتسلسل لجين coa من كل العزلات انتج انواع مختلفةاعتمادا على الاحجام بمدى من 500 - 900 زوج قاعدي التي ميزت كما يلي النوع الاول coa500 زوج قاعدي والنوع الثاني 600 زوج قاعده ,النوع الثالث 700 زوج قاعده,النوع الرابع 800 زوج قاعده والنوع الخامس 900 زوج قاعده وكان النوع الثالث النوع الاكثر شيوعا في العزلات .تنويع جين coa على اساس تفاعل البلمره المتسلسل ل للتنوع الشكلي لطول القطع المتقطعة coa RFLP بواسطة استخدام الانزيم القاطعAuI I لتقطيع ناتج التضخيم لجين coa وانتجت مختلف اشكال التقطيع بواسطة انزيم التقطيع متباينة من80 - 700 زوج قاعدة مع 7 انواع من coa RFLP النوع الاول بين بنسبه (10%),النوع الثاني (5%),النوع الثالث(15%),النوع الرابع (20%),النوع الخامس(20%),النوع السادس (25%) والنوع السابع (5%).النوع السادس كان الاكثر شيوعا وكان بنسبه (25%)من كل العزلات.والنتائج قد بينت بعض العزلات بنسبه (20%)لم تقطع بواسطة الانزيم القاطع Alu I.النتائج بينت تاثير سموم المكورات العنقودية المنقى جزئيا على خلايا سرطان الجلد B6 كنموذج لخلايا سرطان جلد الانسان بالاضافه لذلك فقد بينت ان سموم المكورات العنقودية لها فعل مثبط لهذه الخلايا . | A total of 100 stool specimens were collected from patients who admitted to Al Hilla Teaching Hospital ,and Merjan medical city during a period extending from July 2016 to September 2016. The .Then the specimens cultured in selective media and identified by using biochemical and bacteriological tests.Only (20)isolate of Staphylococcus aureus isolates were recovered. Biofilm formation was detected by tube method and tissue culture plate technique, in tube method(TM)the results showed that all S. aureus isolates (100%)were biofilm producers as contrast to tissue culture plate (TCP) the results showed that (15%) Staphylococcus aureus isolates were produces strong biofilm and (50%) moderate biofilm also (35%) were weak or non biofilm forming according to the absorbance at OD 570nm. Some virulence factors of all Staphylococcus aureus isolates were studied as hemolytic activity on blood agar , and the results showed that all Staphylococcal aureus isolates have the ability for producing beta hemolysis ,and Staphylococcal Phospholipase C production were tested and the result showed that (70%) Staphylococcus aureus of isolates were able to produce Phospholipase enzyme extracellularly. Antibiotic susceptibility to a variety of antibiotics has been investigated by using disk diffusion method. It has been found that these isolates showed resistant to more than one antibiotic. It has been found that S.aureus isolates were resistant to Ceftiaxone(85%) and showed resistance (75%) to imipenem. whereas the isolates resistance to tetracycline and erythromycin was (65%),also the resistance for each, oxacillin and amikacin, at (25%), (35%), respectively. While most isolate were sensitive togentamycin and chloramphenicol was (15%) for each. Polymerase chain reaction (PCR) used for detection of virulence genes that coding to enterotoxin ,exofoliative toxin ,toxic shock syndrome toxin and coagulase enzyme of S. aureus isolates, it was found that were positive results were showed for, sea, seb , agr, seg sei ,seh ,tst, eta, etb ,coa with number and percentage,8(40%),7(35%),19(95%), 13(65%) 20(100%), 1(5%), 20(100%), 9(45%), 14(70%) and 20(100%), respectively.PCR amplification of coa gene from 20 isolates product different types based on size range from (500 - 900 ) bp were recognized as follows coa types I (500bP) ,coa type II(600 bp),coa type III(700 bP),coa types IV (800 bp),and coa type V (900bp). and were found at(500bp 5%,600bp 30%700bp50%,800bp5% , 900bp10%) The majority of the isolate exhibit coa type(III) . PCR - RFLPTyping of coagulase (coa) gene and polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism by using AulI restriction enzyme digestion of the PCR coa product generated different Aul I restriction pattern with the number of fragments varying from one to three and with size of the fragment varied from 80 - 700bp with 7 pattern of coa RFLP, pattern type I showed (10%),type II(5%),type III (15%),type IV(20%),type IX(20%),type X(25%),type XI(5%) typeX was the most common and it revered ( 25 %)of all isolate. The result in this study also rater that some strain ( 20% )were not digested by Aul I enzyme. The results show effect of partially purified of S.aureus toxin on B16 melanoma as a model for human skin cancers. It has been revealed that S.aureus entero toxin have an inhibiter effect on these cells.
