دراسة بعض الجوانب المناعية لبكتريا Listeria monocytogenes المعزولة محليا == Some Immunological study 0n Listeria monocytogenes isolated Locally
Author name:
ميادة فرحان درويش
Supervisor name:
ضحى سعد صالح
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Immunology
Degree:
Doctorate
University:
University of Baghdad
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3074 - p.pdf
Abstract:
تضمنت الدراسة الحالية التحري عن بكتريا Listeria monocytogenes في (148) عينه سريريه تضمنت( 123) عينة من مسحات مهبل عليا (High Vaginal Swab)، و25 عينة مشيمه (Placenta) من النساء المجهضات، وتم الحصول على اربعة عزلات من مسحات المهبل العليا بنسبة ( 2.70) % في حين لم تعزل من عينات المشيمه ، وتم تشخيص العزلات كيموحيويا وزرعت على الاوساط الانتقالية والتفريقية واختبرت حساسيتها للمضادات الحيوية المختلفة. اذ ظهر ان العزلات حساسه جميعها لمضادات الامبسلين والجنتاميسين ومقاومه لمضادات حامض النالدكسيك واللنكومايسين ، ودرست قدرة العزلات البكتيرية على استحثاث الجهاز المناعي في الفئران المختبرية المحقونة باحد العزلات من خلال اجراء عدد من الاختبارات المناعية ومنها الفعالية البلعمية، وقابلية التحول اللمفاوي، وفرط الحساسية الاني والاجل، اظهرت النتائج ان العزلة التي اعطيت الرمز M4 - Lis هي الاكفا بين العزلات . حضرت اللقاحات من بكترياListeria monocytogenes العزله Lis - M4 بطريقة التضعيف (Live attenuated listeria) ولاول مرة محليا ، وكذلك حضرت بطريقة القتل بالحرارة ( listeria Heat killed) . تم حساب قيمة الجرعة القاتلة النصفية للفئران المحقونة بالعالق البكتيري العزله Lis - M4 والجرعه القاتله النصفيه اللقاح الحي المضعف واللقاح المقتول بالحراره المحضرين منها على النحوالاتـي (107×2.12 , 107×3.3 , 104×2.6) وحدة مكونه للمستعمرات / 1مليلتروعلى التوالي. وتم اختيار التركيز 107و 106 , 108 لغرض تقويم التركيزالاكفا في تعزيز الاستجابة المناعية .قيمت بعض جوانب الاستجابة المناعية في الفئران باستخدام الفحوصات الاتية فحص التحول اللمفاوي ، اختبار البلعمة ، واختبار فرط الحساسية الاني والاجل ، كما تم قياس الفعالية النوعية لانزيم الادينوسين دي امينيزAdenosin deaminase (ADA) وباستخدام تراكيز ثلاث CFU 108 , 107 , 106 في 1 مليلتر من اللقاحين والعالق البكتيري وبواقع ثلاث فئران لكل معاملة مع وجود مجموعة سيطرة حقنت بماء الملح الوظيفي . اظهرت النتائج ان اللقاح الحي المضعف هوالاكفاء وباستخدام جرعة منشطة واحدة بعد ثمان ايام من التلقيح حيث ظهر اعلى معدل لنسب الخلايا البلعمية الملتهمة واعلى نسب للخلايا اللمفاوية المتحولة واعلى معدل في تفاعل فرط الحساسية المتاخر والاني ، واعلى معدل للفعالية النوعية لانزيم ADA ، وان زيادة عدد جرع اللقاح المقتول بالحرارة ولحد الجرعة الثالثة يزيد من الاستجابة المناعية لهذا اللقاح . كذلك قيمت بعض جوانب الاستجابة المناعية في النساء المجهضات نتيجة الاصابة ببكتريا الليستريا والمجهضات لاسباب اخرى ، اظهرت النتائج وبوضوح ارتفاع معدل كلا من γINF - ( 10.97 vs 6.25) وIL - 12 ( 289.19 vs 159.54) وبفارق عالي المعنوية (p<0.00) عند المقارنة بين مجموعة السيطرة والمجهضات بسبب الاصابة بالليستريا وكذلك ارتفاع قيم IgG , IgM , IgA وارتفاع كلا من C3 , C4 نتيجة الاصابة ببكتريا Listeria monocytogenes ، اكدت النتائج قدرة الليستريا على تحفيز الجهاز المناعي بصورة جيدة من خلال تحفيزها للحركيات الخلوية ، اعطت هذه الحقيقة دعما لامكانية استخدام لقاح الليستريا في دراسات اخرى بوصفه علاجا مناعيا ضد العديد من الامراض . | The present study was achieved to investigate the Listeria monocytogenes in clinical samples such as high vaginal swabs and placenta from women with repeated abortion beside samples of blood . Listeria monocytogenes was isolated in percentage of (2.7%) from high vaginal swabs (123) samples but not isolated from placenta 25samples,and the isolates diagnosed dependent on the biochemical test and growth characteristic on selective and differential culter media. The susceptabibility of isolates to different antimicrobial agent was studied , It appeared that all isolates were totally sensitive to Gentamycine and Ampicillin but they were totally resistant to Lincomycine and Nalidaxic acid . The activity of isolates to stimulate immune response in mouse injected by one of these isolates througe number of immune testing which it : phagocytosis , lymphocyte transformation assay , immediate and delayed hypersensitivity reaction ,The result show the Lis - M4 is the best between them . The vaccine prepared from listeria monocytogenes in tow ways , live attenuated listeria is first prepared from bacterium listeria monocytogenes in our country ; also heat killed listeria was prepared . Calculated LD50 in injected mice by Lis - M4 listeria and mice injected by live attenuated vaccine and heat killed listeria vaccine ,So the result as following ( 2.6 ×104 ;3.3 ×107 ; 2.12 ×107 ) in 0.1 ml respectively , and chose the 106 ,107,108 to evalute the best concentration the in stimulate immune response. Immune response in mice evaluated by using the following assay : lymphocyte transformation assay , phagocytosis , immediate and delated hypersensitivity , also Adenosine deaminase specific activity was studied , by use three concentration 106 , 107 , 108 in 0.1ml from tow vaccines and bacterial suspention in 3 mice to each test in addition to control group injected by phosphate buffer saline . The results of this study confirmed that , live attenuated vaccine in boosting dose after 8 days from vaccination is the best efficient and gave highest mean in phagocytosis , lymphocyte transformation assay and significant increase in delayed hypersensitivity and arthus reaction , and highest mean in specific activity in adenosine deaminase enzyme , also show increase vaccine dose stimulate immune response for this vaccine. The immune response in abortion women which infected by Listeria monocytogenes compared with abortion women as aresult different causes , the result observed increase mean in INF - γ (10.97 vs 6.25) and IL - 12 (289.19 vs 159.54 ) by compared with control group , also highest mean in IgG , IgA , IgM , and C3 , C4 as a result Listeria infection . This result amphesis the ability of Listeria to premote immune response through out stimulate cytokines and demonstrate used this vaccine as immunotherapy in several disease
