عزل وتشخيص الفطريات الجلدية من نماذج الانسان باستخدام تقنية تفاعل البوليمرز المتسلسل (PCR) والنشاط المضاد لمستخلصات قشور البصل == Isolation and Identification dermatophytes from human Samples By using polymerase chain reaction (PCR) Technique and Antidermatophytic activity of onion peel extracts
Author name:
محمد عبد الكريم الخفاجي
Supervisor name:
عبد العزيز مجيد نخيلان
General topic:
Biology
Specific topic:
Plant
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3414 - p.pdf
Abstract:
الفطريات الجلدية هي واحدة من مجموعة من الفطريات ذات الصلة وثيقة والتي لديها القدرة على غزو الانسجة المتقرنة (الجلد والشعر) في الانسان والحيوانات لاحداث الاصابة الجلدي دعى Dermatophytosis والمعروفة لنا على انها التهابات حلقة الدودة. لعزل وتحديد الفطريات الجلدية من العينات السريرية ودراسة النشاط المضاد للفطريات antidermatophytic للمستخلصات قشور البصل (Allim cepa) . جمعت 60 عينة من مستشفى ابو قاطع ابي غريب، 22 عينات من مستشفى اليرموك و18 عينة من تلاميذ المدارس الابتدائية في ابو غريب على التوالي. وقد اجريت الدراسة خلال الفترة الممتدة من اكتوبر 2014 الى اذار 2015. باستخدام الفحص المجهري والزرع تشخيصت وجود فطريات جلدية لدى (90) مريض من اصل (100) مريضاﱟ فقط اي بنسبة (90%) ، وقد تبين ان 59 (59%)من الحالات كانت موجبة بالفحص المجهري والزرع . في حين عدد الحالات السالبة في الفحص الزرعي فكان 31 اي بنسبة (31%) حيث كانت انواع مختلفة ل Candida spp، اما عدد الحالات السالبة بالفحص المجهري المباشر والزرع فهو 10 (10%) حيث كانت اجناس فطرية اخرى مثال على ذلك Penicillium sp, Aspergillus niger . اظهرت الفحوصات المختبرية تباين الانواع الفطرية الجلدية المعزولة اذ ان اكثر الانواع الفطرية الجلدية المعزولة كان الفطر Trichophyton.mentoagrophytes ظهر في 27 عينة (45.7%) ,يليه الفطر Microsporum.canis ظهرفي 18 عينة (30.6%) , والفطر Trichophyton.rubrum كان في 9 عينات (15.25%) وبينما كان الفطر Trichophyton.verrucosum اقل الانواع الفطرية المعزولة وظهر في 5 عينات فقط وبنسبة (8.4%) . واظهرت النتائج تباين في نسبة الاصابة بين الذكور والاناث ، حيث سجلت اعداد ونسب المصابين بالامراض الفطرية تبعا للجنس. اذ سجل عدد الذكور 39 اصابة اي (66.1%) اما عدد الاناث فقد بلغ 20 اصابة اي (33.9%).تبين من خلال هذه نتائج هذه الدراسة ان الاصابات بالامراض الفطرية كانت اكثر تكرارا خلال الاشهر المعتدلة درجة الحرارة حيث لوحظ زيادة نسبة الاصابة في فصل الربيع والذي سجلت فيه اعلى نسبة للاصابة خلال شهر اذار (35%) ،شهر شباط (25%) ، شهر كانون الثاني (18%) ، شهر كانون الاول (12%) ، شهر تشرين الثاني (10%) على التوالي .هرت النتائج وجود علاقة ما بين الاصابة ومناطق سكن المرضى حيث بلغت نسبتها في المناطق الريفية (84%) مقارنة مع المناطق الحضرية التي بلغت (16%) ، كما اظهرت ان الفطريات الجلدية التي تنتقل عن طريق ملامسة الحيوانات اكثر تكرارا (84.4 %) من كانت الملامسة البشرو التي كانت اقل تكرارا (15.6 %).شخصت الفطريات الجلدية المعزولة بطريقة تفاعل سلسلة انزيم البلمرة PCR ،واظهرت النتائج تماثل في الوزن الجزيئي للحزم المتضاعفة وحيث قورن مواقع هذه الحزم مع موقع الحزم ذات الاوزان الجزيئية المعروفة العائدة للدليل الحجمي, حيث جاءت النتائج متماثلة للحجم المتوقع وهو 500bp (زوج قاعدة) كناتج لعملية تضاعف البادىء primerالمتخصص بالفطريات الجلدية لكل M. canis , mentogrophyt T. , T. vrrucosum . وقد تمت دراسة التاثير التثبيطي لكل من المستخلص المائي والكحولي (الحار والبارد ) لقشور ثمرة البصل ، كل على حدة في النمو القطري لمستعمرات الفطريات الجلدية والاكثر تكرارا حيث شملت الفطرين M. canis ,. mentogrophyt T . واظهرت نتائج استخدام المستخلصات النباتية لقشور ثمرة البصل ان ادنى التركيز المثبط للنمو من المستخلص المائي الحار هو (0.78)ملغم/مل للفطر T.mentogrphytes اما الادنى التركيز القاتل فهو (25) ملغم / مل، اما الفطر M .canis فان الادنى التركيز المثبط للنمو هو (0.78)ملغم/مل اما التركيز القاتل فهو (25) ملغم / مل . وللمستخلص المائي البارد فان ادنى التركيز المثبط للنمو هو (1.56)ملغم /مل للفطرT.mentogrphytes واما ادنى التركيز القاتل فقد كان (25) ملغم/مل. واما فطر M .canis فادنى التركيز المثبط للنمو هو (3.125) ملغم /مل والتركيز القاتل فقد كان (12.5) ملغم/مل. كما تبين ان لادنى التركيز المثبط من المستخلص الكحولي الحار والكحولي البارد لقشور البصل هو (0.78) ملغم/مل على النوعين الفطريات ، اما ادنى التركيز القاتل للمستخلص الكحولي الحار والبارد فهو(50) ملغم/مل بالنسبة للفطر M. canis ,. mentogrophyt T . | Dermatophytes are one a group of closely related fungi that have the capacity to invade the keratinized tiusse (skin and hair) of human and other animals to produce cutaneus infection called Dermatophytosis commouly referred to as ring worm infections . To isolate and identify the dermatophytes from clinical samples and to study the antidermatophytic activity of onion (Allim cepa ) extracts . 60 sample from Abu Graib Hospital , 22 samples from Yarmook Hospital and 18 sample from elementany school pupils Abu Graib regian were Collected respectively . The study was conducted during the period extended from oct , 2014 to Mary ,2015 . by microscopial examination and cultivation have been diagnosed with the presence of Dermatophyte at (90) patients only at a rate (90%), has been shown that 59 (59%) of the cases were positive Result by microscopic examination and cultivation. As the number of negative cases in the examination cultivation was 31 ( 31%), where the different genus for Candida sp, either the number of negative microscopic examination and cultivation is 10 cases (10%), where anther genus of fungi for example Penicillium, Aspergillus niger. When you identify the types of fungi, laboratory tests showed fungal species isolated skin variation، The most common fungi isolated were T.mentoagrophyt where the sample was 27 (45.7%), followed by M.canis where the 18 samples (30.6%) , was T.rubrum 9 samples (15.25%), and while The T.verrucosum was less fungal species isolated where , the number of isolated samples only 5 (8.4%).There were significant differences in Infection rate between males and females, were recorded prepare ratios infected with fungal diseases Accordingly sex, and as it was recorded that the number of males 39 (66.1%) The number of females has reached to 20 (33.9%) .It has been shown through this study that fungal diseases Infection were more frequent during of moderate temperature months of year ,observed increase in Infection of the during spring, which recorded the highest rate of infection during the month of March (35%), followed by injuries recorded in the month of February (25% ) then the month of January (18%) and the month of December (12%) and then the November (10%) respectively.about the relationship between infected with Housing areas, showing High incidence was recorded in rural regions (84%) in comparison with urban regions(16%). the study demonstrated a significant shift in the skin fungus that causes the disease towards animal species (84.4% ), while the human species less frequent (15.6%). Diagnosed skin fungi by (PCR) manner enzyme polymerase chain reaction, The results showed similar in molecular weight of packages multiplying and these sites packages as compared to with site with molecular weights known as belonging to the manual volumetric packages ,where the results were similar to the size of the expected site, a 500bp (pair base) as a product of the process started it doubled primer M. canis, T. mentogrophyt, T. vrrucosum.Has been studied the inhibitory effect of each of the aqueous and alcoholic extract (hot and cold) to peel the onion, Separately in growth of the colonies skin fungi isolated from injuries skin diseases, and the most frequent during this study, which included fungi Micrsporum canis , mentoagrophyt Trichophyton.And it showed the results of the use of plant extracts to peel onions that minimum inhibitory concentration(MIC) of the growth of the aqueous extract is (0.78) mg / ml for T.mentogrphytes The minimum Focus concentration (MFC) is 25 mg / ml, either MIC for M .canis is (0.78) mg / ml The MFC 25 mg / ml . To the water cold extract, MIC is (1.56) mg / ml of T.mentogrphytes MFC is 25 mg / ml. The M .canis MIC is (3.125) mg / ml MFC is (12.5) mg / ml.And the MIC of the hot alcoholic and cold alcoholic extract of onion peel is (0.78) mg / ml and the MFC is 50 mg / ml for both M. canis, T. mentogrophyt .
