عزل وتشخيص الفطريات المرافقة لتعفن الفواكه المستوردة وطرق مكافحتها == Isolation and Identification of fungi associated for rotting of imported fruits and methods of their control
Author name:
مؤيد صالح حسين
Supervisor name:
عبد العزيز مجيد نخيلان | هادي مهدي عبود
General topic:
Biology
Specific topic:
Plant
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3430 - p.pdf
Abstract:
اجريت هذه الدراسة في مختبر الفطريات، قسم علوم الحياة، كلية العلوم - الجامعة المستنصرية ٬ ومختبرات دائرة البحوث الزراعية - وزارة العلوم والتكنولوجيا ؛ للكشف عن الفطريات المرافقة لثلاثة انواع من الفاكهة المستوردة (الليمون حامض ، التفاح والخوخ) . تم جمع (60) عينة عشـوائية (20 لكل نـوع) من اربع اسـواق محلية (باب المعظم ، الكاظمية ، علاوي الحلة، العطيفية ) في مدينة بغداد. للفترة من 15 - 5 ولغاية 15 - 8 لعام 2013 . وبعد تحديد نسبة حدوث المرض،عزلت الفطريات من الفواكه المتعفنة على الوسط الزرعي PDA المدعم ب 100 جزء بالمليون من الكلورامفينيكول. تمت تنقية الفطريات المعزولة٬ وتم حساب تردد كل عزلة لكل الفطريات. اظهرت النتائج عزل 141 عزلة فطرية تنتمي الى اربعة اجناس : Penicillium, Aspergillus ,Rhizopus Alternaria , توزعت على ستة انواع من الفطريات. اكثر الانواع ترددا Aspergillus niger بتردد 37.6% يليه Penicillium expansum بتردد 24.8% ثم Penicillum digitatum ٬ Aspergillusflavus ٬Rhizopus Stolonifer وAlternaria.citri التي سجلت 14.9% ٬ 9.2%٬ 7.8% و5.7% . اظهرت النتائج ايضا ان الفطريات الاكثر عزلا كانت من سوق باب المعظم وبنسبة 49.6% يليه سوق الكاظمية 24.8% ثم سوق العلاوي والعطيفية التي سجلت كل منهما 12.8% . استنادا الى تردد العزلات تم اختيار 36 عزلة لاختبار القدرة الٳمراضية باستخدام ثمار التفاح كعائل نباتي . انتخبت عشر عزلات عالية الضراوة : ٳثنان تعود الى جنس البنسليوم P.expansum, واحدة تعود الى P.digitatum , اربعة تعود الى A.niger عزلة واحدة تعود الى R. stolonifer , وعزلة واحدة تابعة ٳلى Alternaria citri وكذلك عزلة واحدة تنتمي الى A.flavus التي اعطيت الرموز الاتية (1 - 2) (1 - 6)، (1 - 7)، (2 - 1) (2 - 3)، (2 - 4) (2 - 5)، (3 - 1)، (4 - 1)، (5 - 1) على التوالي ٬ والتي استخدمت طوال مدة الدراسة. اظهرت نتائج التاثير السمي لحامض الساليسيلك (SA) في الفطريات ٬ ان (SA) في 400 جزء بالمليون ثبط بالكامل النمو القطري والتبوغ للعزلات (1 - 7) P.digitatum و(3 - 1) R. stolonifer ، في حين ان التركيز نفسه في الوسط السائل ثبط بالكامل الوزن الطري والجاف للكتلة الحية للعزلة (1 - 6) expansum P.. كذلك اظهرت النتائج ان الكايتوسان في 1.6 ملغم / مل ثبطʹ بالكامل النمو القطري والتبوغ للعزلة (3 - 1) R. stolonifer في حين ان التركيز نفسه احدث انخفاضا عاليا في الوزن الطري والجاف من الكتلة الحيوية الفطرية للعزلة (1 - 7) P.digitatum التي سجلت 0.15 غرام و0.01 غرام على التوالي. اظهرت النتائج ان توليفات من حامض السالسيلك والكايتوسان اثرت على النمو القطري، التبوغ والوزن الطري والجاف للعزلات (1 - 2) P.expansum و(2 - 5) A.niger وان التوليفة 75 - 25 % كانت الاكثر فعالية. كما اظهرت نتائج الاختبارات التطبيقية في رش كل من حامض السالسيلك بتركيز 400 جزء بالمليون والكايتوسان بتركيز 1.6 ملغم/مل والتوليف بين حامض السالسيلك والكايتوسان بالتركيز 75 - 25 جزء بالمليون - ملغم/مل على ثمار التفاح الملقحة بالعزلة (1 - 2) التي تعود للفطر P.expansum ٬ ان الثمار كانت اكثر مقاومة لظهور العفن في جميع المعاملات قبل 24 ساعة من التلقيح وحتى نهاية اليوم الخامس للاختبار بالمقارنة مع الثمار المعاملة بعد 24 ساعة من التلقيح ٬ حيث وصل النمو ٳلى 2.33 سم2 في الثمار المعاملة بحامض السالسيلك ٬ في حين وصل النمو في الثمار المعاملة بالكايتوسان ٳلى 2.65 سم2 ٬اما الثمار المعاملة بالتوليف بين حامض السالسيلك والكايتوسان فقد وصل النمو الى 3.57 سم2 ٬ في حين وصل معدل النمو لثمار السيطرة في اليوم الخامس ايضا الى 10.88 سم2 . واظهرت نتائج قدرة اربع عزلات فطرية هي (1 - 2) Penicillium expansum ٬ (1 - 11) P. digitatum ٬ (2 - 1) A. niger ٬ (2 - 19) A. niger في انتاج انزيمي البكتنيز Pectinase والسليليز Cellulase ان العزلات جميعها لها القابلية على ٳنتاج الانزيمين . وارتبطت الفعالية الانزيمية مباشرة بالقابلية الٳمراضية للعزلات ٬ فوجد ان العزلتين العاليتي الضراوة (1 - 2) (2 - 1) اظهرت فعالية انزيمية عالية بلغت 23.59 ٬ 22.55 و64.83 ٬ 62.36 وحدة/ مل . في حين اظهرت العزلات الواطئة الضراوة (1 - 11) (2 - 19) فعالية انزيمية بلغت 9.44 ٬ 15.87 و43.44 ٬ 47.89 وحدة/مل لانزيم Cellulase وPectinase على التوالي . | This study was conducted in laboratory of fungi , Biology Department , College of Sciences - University of El - Mustansiriya and laboratories of Directorate of agricultural research , Ministry of Science and Technology to detect the fungi associated with three kinds of imported fruit ( lemon , apple , peach). Sixty random samples (20 for each kind ) were collected from four local markets (Bab El muadium, Kadhmia, Alawi alhilla, Eletaphia) at Baghdad city After determination of the percentage of disease incidence , the rotted fruits subjected for fungal isolation on PDA medium supplemented with 100 ppm Chloramphenicol . Isolated fungi were purified then the frequency of each isolate was calculated for all fungi. The results showed the isolation of 141 fungal isolate belonged to four genera : Penicillium, Aspergillus, Rhizopus, Alternaria and distributed among six fungal species . The most frequent isolated species Aspergillus niger 37.6 %, followed by Penicillium expansum 24.8 % and P. digitatum, A.flavus, R. Stolonifer and A.citri which recorded 14.9 % , 9.2% , 7.8% and 5.7 % respectively. The results also showed that the most isolated fungi were from Bab El muadium 49.6 %, followed by Kadhmia 24.8 %, then Alawi alhilla and Eletaphia which each of them recorded 12.8 % . Based on the frequency of isolation 36 isolates were selected for pathogenicity test using apple fruits as host Plant . The high virulent ten isolates were selected : two belonged to Penicillium expansum , one belonged to Penicillium digitatum , four belonged to Aspergillus niger one isolate belonged to Rhizopus stolonifer , one isolate belonging to Alternaria citri and one isolate belonged to Aspergillus flavus which given the following codes (1 - 2) (1 - 6) , ( 1 - 7 ) , (2 - 1 ) (2 3) , ( 2 - 4 ) (2 - 5 ) , (3 - 1 ) , (4 - 1 ) , ( 5 - 1 ), respectively were used throughout the study . The results of Fungitoxic effect of Salicylic acid(SA) revealed that (SA) at 400 ppm completely inhibited the radial growth and sporulation of ( 1 - 7 ) P. digitatum and (3 - 1 ) R. stolonifer isolates , while the same concentration in broth medium completely inhibited fresh and dry weight of biomass for (1 - 6) P. expansum . The results showed that Chitosan at 1.6 mg / ml completely inhibited the radial growth and sporulation of isolate (3 - 1 ) R. stolonifer while the same concentration induced the high reduction in fresh and dry weight of fungal biomass for isolate ( 1 - 7 ) P. digitatum which recorded 0.15 g and 0.01 g respectively. The results of the combination effect of Salicylic acid and Chitosan mixture on radial growth , sporulation , fresh and dry weight of isolate (1 - 2 ) P.expansum and (2 - 5 ) A.niger showed that the 75 - 25 % mixture was the most effective one. The results of the tests applications in spraying of Salicylic acid concentration of 400 ppm and Chitosan concentration of 1.6 ml / mg and combination between Salicylic acid and Chitosan concentration 75 - 25 ppm - ml / mg on the apples vaccinated with isolate (1 - 2) P.expansum showed that fruits were more resistant to the appearance of mold in all Treatments befor 24 hours of vaccination until the end of the fifth day of the test, compared with fruits treatment after 24 hours of vaccination, Reached growth to 2.33 cm 2 in fruits treated with Salicylic acid ٬ while growth reached in fruits treated with Chitosan to 2.65 cm 2 , and the fruits which treated with combination between Salicylic acid and Chitosan the growth has reached to 3.57 cm 2 , while the growth rate of the fruits of control on the fifth day to 10.88 cm 2 . The results of the ability of four isolates (1 - 2) P. expansum, (1 - 11) P. digitatum, (2 - 1) A. niger and (2 - 19) A. niger in production of Cellulase and Pectinase enzymes showed that all tested isolates are capable of production both enzymes , but the ability was positively correlated with the isolate virulence . The virulent isolate (1 - 2 ) , (2 - 1) showed the highest enzymaric activity 23.59 , 22.55 , 64.83 and 62.36 Enzymatic units / ml . While the A virulent isolates ( 1 - 11) (2 - 19 ) showed the lowest enzymatic activity 9.44 , 15.87 and 43.44 , 47.89 unit / ml respectively.
