التشخيص والتوصيف الجزيئي لبكتريا Clostridium perfringens المعزوله من حالات مرضية سريرية في مدينة الحلة == Molecular Diagnosis and Characterization of Clostridium Perfringens from Clinical Samples in Al - Hilla city
Author name:
علياء محمد حمود الشمري
Supervisor name:
علاء هاني الجراخ | ميساء صالح الشكري
General topic:
Medicine
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Doctorate
University:
University of Babylon - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Babylon
First pages:
19T1257 - p.pdf
Abstract:
تهدف هذه الدراسة لمعرفة وبائية بكترياC. Perfringens في العينات المؤخوذة في محافظة بابل. تم جمع 140عينة من الجروح العميقة من المرضى الداخلين في مستشفيات مدينة الحلة الرئيسية (مستشفى الحله التعليمي ومدينة مرجان الطبيه) والذين يعانون من مرض السكري المزمن وايضا من مرضى تعرضوا الى طلق ناري فضلا عن المرضى الذين يعانون من التهاب الخلوي اللاهوائي في الجلد(anaerobic cellulitis ) للفترة من شهر شباط ولغاية شهرتشرين الاول 2016. بالاضافه الى ذلك تم تشخيص وعزل بكترياC. perfringens بطرق مختلفة منها استخدام الطرق البكتيرية التقليدية من خلال طرق التنمية على الاوساط الزرعية الاختيارية لهذه البكتريا واظهرت النتائج الحصول على 3 (2.14%)عزلات كان عزل اثنان منها 1.42%)) من مرضى السكري المزمن اما العزله الثالثه (0.72%) فقد تم الحصول عليها من الذين تعرضوا لطلق ناري في حين لم يتم الحصول على عزلات من المرضى الذين يعانون من الالتهاب الخلوي اللاهوائي . وكذلك تم تاكيد التشخيص باستخدام المعلم الوراثي المستند على دور جين 16s rRNA وجين16S - 23S spacer rRNA حيث اظهرت النتائج, من اصل 140 عزلة فان 7 عزلات تعود لبكتريا C. perfringens. بالاضافة الى ذلك, تم التحري عن قابلية هذه البكتريا واختبار قابليتها على انتاج انزيم (phpspholipase C) ووجد ان جميع العزلات منتجة الى هذا الانزيم. كما تم الكشف عن حساسية عزلات البكتريا اللاهوائية تجاه 24 مضادا حيويا. بينت نتائج الدراسة ان جميع العزلات اظهرت حساسية عالية (100%) تجاه كل من penicillins .مثل benzypencillin, ,amoxicillin فضلا عن حساسيتها تجاه - lactamase inhibitor مثل Ampicillin - sulbactam وحساسيه عالية لكل من metronidazole وaminoglycosidesومن ناحية اخرى، اظهرت جميع العزلات مقاومة عالية لكل من مضادات tetracyclin, Linezolid, levofloxacin, erthromycin بينما اظهرت هذه العزلات تغاير في درجات المقاومة تجاه مضادات pipracillin, Clindamycin, and Impenem.تم استخدام الطرق الوراثية في الكشف عن جينات المقاومة للمضادات الحياتية كجيناتM,Q,W,B) ) tet الخاصة بالكشف عن المقاومة للتتراسايكلين وجينات erm(A,B) للكشف عن المقاومة للكلندامايسين وجين nim للكشف عن المقاومة للمترونيدازول حيث اظهرت النتائج ان الجين tet M كان ذا سيادة عالية بنسبة 71.42 %تم استخدام طريقة التشخيص الجزيئي لتوكسينات البكتريا (alpha,epsilon, iota) للاستدلال على وجود جينات (cpa, etx, iap)، في C. perfringens وبنسبة 100%, 28.4%, 28.4% )) على التوالي.بالاضافة الى ذلك تم استخدام جينات cpa, etx and iap لقياس تعاقب القواعد النيتروجينية للمادة الوراثية للعزلات المدروسة فضلا عن تسجيلها في بنك الجينات العالمي ( ,(Gene Bank,اذ تم خلال هذه الدراسة ولاول مرة في العراق، الحصول على خمسة ارقام انضمام الى بنك الجينات العالمي (5 accession numbers)، حيث تم نشر هذه الارقام في بنك الجينات الامريكي gene bank - NCBI وهذه الارقام هي : جينiap : KY523199, KY523200 اما فيما يخص الجينetx فكانت الارقام هي : KY523201, KY523202 وفيما يخص الجين cpaفكان رقم الانضمام هو : . KY523203تعد هذه الدراسه انها اول دراسه في العراق تضمنت تحليل , دراسه تعاقب القواعد النايتروجينية للمادة الوراثية فضلا عن التسجيل في بنك الجينات العالمي لسموم عزلات محلية من بكتريا C.perfringens معزولة من عينات سريرية. | This cross sectional and hospital - based study aimed to studying the incidenceof Clostridium perfringens in clinical samples in Babylon province. A total of 140 wound swabs were taken from patients admitted to two main hospitals in Hilla city, Iraq (Hilla Teaching Hospital and Medical Marjan City), during the period from February to October 2016. Swabs were collected from diabetic patients, anaerobic cellulitis, and bullet wounds. These wound swab samples were subjected to different methods for identification of C. perfringens according to standard method. It was found that 3 (2.14%) C. perfringens isolates were recovered, of which 2 isolates (1.42%) were obtained from diabetic patients, 1 isolates (0.72 %) from bullet wounds, No isolates are recovered from the other clinical samples (cellulitis). Furthermore, molecular detection method was applied by using 16s rRNA, 16S - 23S intergenic spacer rRNA genes as a genetic marker for confirmation of detection of C. perfringens isolates,7 isolates of C. perfringens out of 140 are detected by using PCR with specific primer.The study also focuses on the ability of this bacteria to produce Phospholipase C and it was found that all isolates are positive for this enzyme (100%) . The results of antibiotic susceptibility testing using Vitek 2 system and disc diffusion method (DDT) of C. perfringens isolates (No.= 3) against 24 antibiotics showed that all isolates were highly sensitive to penicillins, (benzylpenicillin, and amoxicillin), all isolates (3/3) were sensitive to - lactamase inhibitor such as Ampicillin - sulbactum. They were more susceptible to metronidazole and aminoglycosides in (3/3). On the other hand, all isolates were highly resistant to tetracycline, Linezolid ,levofloxacin, and erythromycin However, these isolates expressed different degree of susceptibility towards other antibiotics (Clindamycin, piperacillin and Imipenem). Molecular detection of C. perfringens of antibiotic resistance genes had been investigated and it had been found that tetracycline resistance gene tet M is the most commonly observed (71.42%) among ribosomal protection genes among C. perfringens isolates. While all isolates (7) gave negative results for other tetracycline resistance genes (tet W and Q, tet B, erm(A), erm(B),nim gens).Furthermore, detection of clostridial toxin (alpha, epsilon, iota toxins was applied using specific genes (cpa, etx, iap) and the results showed that the rate of the presence of these genes are : 100%, 28.8% and 28.4% respectively. The following genes : cpa, etx and iap were used for sequencing analysis, registration in gene bank - NCBI. Five accession numbers were obtained from registration of five sequences of these three genes at gene bank - NCBI : iap gene; accession numbers are : KY523199, KY523200etx gene; accession numbers are : KY523201, KY523202cpa gene; accession number is : KY523203. This is the first study in Iraq which employed analysis sequencing and registration in gene bank - NCBI, of clostriaial toxin of local isolates of C. perfringens obtained from clinical samples
