التوصيف المظهري والجزيئي لبكتريا Staphylococcus saprophyticus الممرضة البولية المعزوله من النساء المصابات بالتهاب المثانة == Molecular and Phenotypic Characterization of Uropathogenic Staphylococus Saprophyticus Isolated From Women With Cystitis
Author name:
فرح علاء عبد الحسين الوائلي
Supervisor name:
جواد كاظم طراد الخفاجي | زينب حمود السعدي
General topic:
Medicine
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
University of Babylon - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Babylon
First pages:
19T1671 - p.pdf
Abstract:
تم في هذه الدراسة جمع وزراعة (140)عينة من منتصف مجرى عينة الادرار التي جمعت من (140) مريضة مصابات بالتهاب المثانه وممن احيلوا الى مستشفى الحلة التعليمي العام ومن العيادة الخاصة للفئه العمريه من 16 - 55 سنة (من اكتوبر 2014 الى يناير2015) وقد تم عزل وتشخيص 14 عزلة فقط من بكتريا Staphylococcus saprophyticus. وقد تمت دراسة بعض عوامل الضراوه المسؤوله عن امراضية هذه البكتريا فقد اظهر اختبار وجود المحفظه للعزلات البكترية بان عزلة واحده فقط من بكتريا S.saprophyticus تحتوي على المحفظه في حين تخلو العزلات ال13 الاخرى منها . ايضا تضمنت هذه الدراسة التحري عن وجود عوامل الاستيطان الاول CFAI)) والثانيCFAII) ) والثالث(CFAIII). وقد اظهرت النتائج بان 13 عزلات اي 92% تمتلك عامل الاستيطان الاول (CFAI) في حين تمتلك عزلة واحده من هذه البكتريا اي 7% عامل الاستيطان الثاني CFAII)), اما بالنسبه لعامل الاستيطان الثالث (CFAIII) فقد اظهرت النتائج بان مايقارب 21% اي 3 عزلات من هذه البكتريا لديها القدره على انتاج هذا العامل . كما اظهرت النتائج ان جميع عزلات S. saprophyticus غير محلله للدم اي غير منتجة للهيمولايسين عندما تنمو على وسط اكار الدم، في حين ان جميع العزلات كانت قادرة على انتاج انزيم اليورييز. وقد تم الكشف عن وجود انزيم البروتييز الخارجي فقد وجد ان 2 (14٪) من هذه البكتيريا كانت قادرة على انتاج هذا الانزيم ، في حين 12(86٪) لم تكن تملك القدرة على انتاج هذا الانزيم .اما بالنسبه للانزيم المحلل للدهون (اللايبيز) فقد اظهرت النتائج بان 8 (57٪) من بكتريا S.saprophyticus كانت قادرة على انتاج انزيم اللايبيز. ايضا شملت الدراسه قابلية البكتريا تكوين الغشاء الحيوي في جميع العزلات البكتيرية وقد وجد ان عزلتين فقط لها القابليه على تكوين الغشاء الحيوي اما العزلات البقيه فقد اظهرت عدم قابليتها على تكوينه . ايضا اظهرت الدراسة بان الغالبية العظمى من العزلات(12) عزلة لها القابلية على انتاج عامل الالتصاق بالخلايا البولية الطلائية Addherence factor)) . كما تم الكشف عن انتاج البكتريوسين من قبل S.saprophyticus وقد اظهرت العزلات نتائج مختلفة لهذا الاختبار ضد انواع مختلفة من البكتيريا التي تشمل E.coli) P.auroginosa)،and S.epidermides, S. penumoniea، وKlebsiella) لكن لم تنتج اي من هذه العزلات مبيد جرثومي ضد E.coliاو P.auroginosa، في حين ان (28٪) منها انتجت مبيد جرثومي ضد Klebsiella و(35٪) منها ضد S.epidermides و2 (14٪) مقابل S.pneumonie اما من ناحية اختبار الحساسية للمضادات الحيوية فان جميع هذه العزلات قد خضعت لهذا الاختبار وقد وجد ان جميع عزلات هذه البكتريا حساسة بشكل تام 100% لكل من Levofloxacin , Cefoxitin, Imipenem , vancomycin .ولكنها حساسة بدرجة اقل لكل من Ciprofloxacin و. Trimethoprime - Sulfamethoxazoleكما واظهرت العزلات مقاومه100% لكل من Nalidixic acid وOxacillin .ولكن بدرجة مقاومه اقل للمضادات Methicillin وGetamycin اما من ناحية الكشف والتشخيص الجزيئي فقد تم استخدام بادئات نوعيه Primer) ) في تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل PCR للتحري عن الجينات الخاصة بانتاج (uafA) بروتين وقد اظهرت النتائج بان جميع العزلات البكترية تمتلك هذا الجين الخاص بالبروتين المسؤول عن الالتصاق بالخلايا الطلائية للقناة البولية. ايضا بواسطة نفس التقنية تم التحري عن الجين المسؤول عن انتاج المحفظة في هذه البكتريا capD وقد اظهرت النتائج بان عزلة واحدة فقط من بكتريا S.saprophyticus تمتلك هذا الجين . وعلاوة على ذلك، تم الكشف عن الجين المسؤول عن انتاج البروتين الالتصاقي المحلل Aas من قبل هذه البكتريا وقد بينت النتائج بان جميع العزلات اظهرت نتائج ايجابيه لهذا الجين وبنسبة 100% . كما تم التحري عن الجين المنتج للبروتين المسؤول عن الارتباط بالكولاجين في هذه البكتيريا واظهرت هذه الدراسة ان عزلة واحدة فقط تمتلك هذا الجين.بالاضافة الى ذلك، في جميع العزلات البكتيرية تم الكشف عن الجين المسؤول عن تشفير وانتاج انزيم اللايبيز Ssp في بكتريا S.saprophyticus باستخدام بادئات نوعية خاصة . وقد اظهرت نتائج البحث في هذه الدراسة بان 14(100٪) من العزلات تمتلك هذا الجين. في هذه الدراسة اتضح ان جينات الضراوه (UafA, Aas , and Ssp) هي الاكثر شيوعا بين العزلات وكذلك اظهرت الدراسه قدرة هذه البكتربا على انتاج الباكتريوسين ضد البكتريا السالبه لصبغة غرام | In this study, a total of 140 mid stream urine specimen were collected from women suffering from cystitis who attended to Hilla General Teaching Hospital from November 2014 to February 2015 to detect the occurrence of Staphylococcus saprophyticus among the collected specimens. The patients age ranged from 16 to 55 years. Only 14 isolates were identified as Staphylococcus saprophyticus . Some virulence factors were studied by phenotypic method in S.saprophyticus isolates. The capsule was present in only one isolate out of 14 whereas the other 13 isolates in this study did not possess the capsule. Colonization factor antigens were also detected in all isolates. It was found that 13(92%) of isolates had CFAI , while 1(7%) of them had CFAII and 3(21%) had the ability to produce CFAIII. The results also showed that all isolates of S. saprophyticus did not produce hemolysin, while all isolates were able to produce urease enzyme. Extracellular protease were also investigated. It was found that 2(14%) of this bacterium were able to produce extracellular protease, whereas the other 12(86%) didn’t have the ability to produce this enzyme. The ability of S.saprophyticus to produce lipases was identified and the results showed that 8(57%) of S.saprophyticus were able to produce lipase enzyme. Biofilm formation was investigated in all bacterial species, and the results showed that only 2(14%) of the isolates that form biofilm ,while the result of adherence test showed that 12(85%) of this bacterium had the adherence activity to attach to the uroepithelial cells. Also the investigation of bacteriocin production in S.saprophyticus revealed that the isolates had shown different results for this test against different types of bacteria that include (E.coli or P.auroginosa, S.epidermidis , S. penumoniae , and Klebsiella) but no one of them had bacteriocin against each of E.coli and P.auroginosa , while 4( 28%) of them had produced bacteriocin against Klebsilla and 5(35%) of the isolates had bacteriocin against S.epidermidis while 2(14%) against S .pneumoniae. All the isolated S.saprophyticus bacterium from urine specimen were submitted to in vitro antibiotics sensitivity test by Kirby - Bauer disc diffusion method . It had been found that S.saprophticus isolates were sensitive (100%) to Cefoxitin , Imipenem , Levofloxacin and Vancomycin but lesser to each of Ciprofloxacin and Trimethoprime - Sulfamethoxazole . However , the isolates showed resistance to Nalidixic acid and Oxacillin , but in a lesser degree to Methicillin . Molecular detection of Ubiquitous uro - adherence factor A was made by using specific PCR primer . This marker was shown to be present in all isolates of this bacterium ,while the molecular detection of the capsular polysaccharides gene capD had shown that only one isolate 1(7%) had this gene and gave positive result for this primer. Moreover, Autolysin - adhesin surface protein Aas was also detected in S.saprophyticus . It was shown that all isolates 14(100%) gave positive result for this gene. The collagen binding protein gene sdrI was also investigated in this bacteria and this study had shown that only one isolate possess this gene.In addition to that , the surface associated protein gene of S.saprophyticus Ssp was detected in this study by using specific primer in 14(100%) of isolates, this gene is responsible for lipase encoding . In this thesis it was found that the virulence factor genes (UafA, Aas , and Ssp) are more common among isolates of S.saprophyticus and this bacteria were able to produce bacteriocin against Gram negative bacteria.
